秦艽為龍膽科植物秦艽（Gentiana macrophylla Pall.）、麻花秦艽 （Gentiana straminea Maxim.）、 粗 莖 秦 艽 （Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.）或小秦艽（Gentiana dahurica Fisch.）的根，為陜西 道地藥材，是我國重要傳統(tǒng)中藥之一，具有祛風濕、止痹痛、清濕熱、 退虛熱之功效。目前研究主要集中在秦艽中環(huán)烯醚萜類化合物，包 括其化學成分、藥理作用、提取工藝等，秦艽中總黃酮類物質(zhì)目前尚 無研究。 黃酮類化合物在自然界中分布十分廣泛，是植物中較為常見的 一種天然色素，總黃酮的常用提取方法包括浸漬法、酶解法、微波提 取法、超聲提取法和超臨界流體萃取法等，其中超聲提取法因其 高效、快速、簡單及成本低等優(yōu)點，在植物總黃酮提取方法中占有重 要地位。

1 材料

1.1 試劑與藥材

秦艽（采摘于陜西省太白縣，經(jīng)生藥教研室雷 國蓮教授鑒定為龍膽科植物秦艽的根），蘆丁對照 品（20170221），購于上海源葉生物科技有限公司； 亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉，乙醇，均為分析純。

1.2 實驗儀器與設備

AUY220 電子天平，上海越平科學儀器有限公 司；TU- 1810 紫外 - 可見分光光度計，北京普析通 用儀器有限責任公司；昆山舒美KQ5200DE數(shù)控超聲波清洗 器，昆山市超聲儀器有限公司。

2 實驗方法

2.1 秦艽總黃酮的提取

精密稱取秦艽粉末 1.0g，置于 100mL 具塞錐形 瓶中，以一定料液比加入 50%乙醇溶液。在一定溫 度、一定功率下超聲處理一定時間，取出后，放冷至 室溫，稱重，加 50%乙醇溶液，補足減失重量，過濾， 收集續(xù)濾液。

2.2 單因素實驗

根據(jù)報道和預實驗的結果，實驗設置 了乙醇體積分數(shù)（60%、70%、80%、90%及 100%）、 超聲時間（15、20、25、30 及 35min）、液料比（1：5、1： 10、1：15、1：20、1：25g/mL） 和超聲功率（100、200、 300、400 及 500W） 四個單因素，固定超聲功率 300W、提取時間 30min、料液比 1：20 及提取溫度 30℃，分別考察以上因素對秦艽總黃酮提取率的影 響，確定各因素的影響和適宜參數(shù)范圍。

2.3 正交優(yōu)化實驗設計

利用正交試驗優(yōu)化分析，在單因素試驗結果的 基礎上，選取料液比、乙醇體積分數(shù)、超聲時間、超聲功率四個因素，采用四因素三水平的正交試驗分析方法，以總黃 酮得率為響應值，優(yōu)選出秦艽總黃酮的最佳提取工藝參數(shù)，正交試 驗的因素和水平見表 1。

2.4 總黃酮含量測定

2.4.1 標準曲線繪制

精密稱取 2.0mg 蘆丁標準品置于 10mL 的容量瓶中，加 70%乙 醇，振搖待對照品溶解后，加 70%乙醇定容至刻度，得到濃度為0.2mg/mL 的蘆丁標準品溶液。分別精密移取 2.0、4.0、6.0、8.0、 10.0mL 蘆定標準品溶液，置于 10mL 容量瓶中，依次編號為 1、2、3、 4、5，用 70%乙醇溶液定容至刻度，得到濃度分別為 0.04、0.08、 0.12、0.16 和 0.20mg/mL 的溶液，從每個容量瓶中各吸取 1.0mL 溶 液置于 10mL 容量瓶中，加入 70%乙醇溶液 3mL 和 5%NaNO2 溶液0.5mL，搖勻，靜置 5 分鐘后，加入 10%A1（NO3 ）3 溶液 0.5mL，搖勻，再靜置 5 分鐘后，加入 5%NaOH 溶液 5.0mL，搖勻，靜置 15 分鐘。以不加蘆丁對照品的溶 液為空白試驗，用紫外 - 可見分光光度計在 510nm 處測定吸光值（A），設濃度為標準曲線的橫坐標，吸 光度為標準曲線的縱坐標，繪制標準曲線并得到線 性回歸方程。結果見圖 1。

2.4.2 樣品的測定

精密吸取上述供試品溶液 1mL，按 2.4.1 操作測 定吸光度，根據(jù)以下公式計算總黃酮得率； Y=（C×V）/m 其中：Y 為總黃酮的得率，C 為總黃酮濃度，V 為 總黃酮體積，m 為秦艽質(zhì)量。

3 結果與分析

3.1 單因素實驗結果

3.1.1 乙醇體積分數(shù)對秦艽總黃酮得率的影響

由圖 2 可以看出，隨著乙醇濃度不斷的增加，黃 酮得率呈先升高后下降的趨勢，這說明隨著乙醇濃 度的提高，溶于乙醇中的黃酮類化合物增加，得率隨 之提高，在乙醇濃度達到 80%時總黃酮得率最大，隨 后就呈下降趨勢。

3.1.2 超聲功率對秦艽總黃酮得率的影響

由圖 3 可以看出，超聲功率在 100～300W 的范 圍內(nèi)，黃酮得率呈上升趨勢，在 300～500W 范圍內(nèi)， 黃酮得率逐步下降，可能因為在一定范圍內(nèi)，超聲在 提取液中產(chǎn)生的空化效應和機械作用能夠有效破碎 植物細胞壁，還能加快溶劑與被提取物質(zhì)之間的的 反應，但是當超聲功率過大時，或許會破壞黃酮類類 物質(zhì)的結構，所以導致總黃酮得率下降。因此，提取 秦艽總黃酮的最佳超聲功率為 300W。

3.1.3 超聲時間對秦艽總黃酮得率的影響

由圖 4 可看出，超聲時間在 15~30min 之間，隨 提取時間延長，總黃酮得率呈上升趨勢；當超聲時間 達到 30min 時，總黃酮得率達到最大值；超聲時間大 于 30min 后，總黃酮得率有明顯下降的趨勢，可能隨 時間延長，熱效應逐漸增強，溫度升高，導致對熱敏 感的黃酮類物質(zhì)轉化降解，提取率降低。因此，最佳 超聲時間為 30min。

3.1.4 料液比對秦艽總黃酮得率的影響

由圖 5 可看出，隨料液比的變化，秦艽總黃酮得 率呈先上升后下降的趨勢；當料液比為 1：15 時，秦 艽總黃酮的得率最高；但是繼續(xù)加大料液比時，秦艽 總黃酮的得率略有降低。這可能是由于當料液比為 1：15 時，大部分的總黃酮類物質(zhì)已經(jīng)溶出，物質(zhì)與溶 劑之間的擴散已達到平衡。

3.2 正交試驗法優(yōu)化

運用正交試驗法對秦艽總黃酮的提取工藝進行 分析。 由正交試驗設計及結果、方差分析表可以看出， 各因素對提取率影響大小次序為：A＞B＞C＞D，即 料液比＞乙醇體積分數(shù)＞超聲時間＞超聲功率。其 中超聲功率影響最小，故可選擇較小水平，料液比具 有顯著性，由正交試驗結果表可以看出，最佳提取條 件為 A3B2C3D2，即料液比 1：20，乙醇體積分數(shù) 80%，超聲時間 35min，超聲功率 300W。

3.3 工藝驗證

精密稱取秦艽粉末 3 份，每份 1.0g，置于 100mL 具塞錐形瓶 中，按照上述正交試驗獲得的最佳工藝進行提取，秦艽總黃酮得率分別為 1.869%、1.875%、1.876％，平均提取得率為 1.873%。



 

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