杏（Prunus armeniaca L.）屬薔薇科（Rosaceae）， 原產(chǎn)中國(guó)。我國(guó)蘊(yùn)藏著豐富的杏類胡蘿卜素資源，據(jù)2016年統(tǒng)計(jì)，新疆杏種植面積達(dá)187.6萬(wàn) 畝，產(chǎn)量達(dá)119.8萬(wàn) t ， 居全國(guó)首位，被稱為世界四大杏產(chǎn)區(qū)之一，其中庫(kù)買提杏因其具有香氣濃郁、果肉厚、纖維少、可溶固形物含 量高、甜酸適口、果肉細(xì)膩滑潤(rùn)等特點(diǎn)，最為出名，具 有優(yōu)良的加工品質(zhì)和廣闊的商業(yè)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

庫(kù)買提杏于2018年6月購(gòu)于新疆烏魯木齊市北園春 水果市場(chǎng)，選取杏果果皮顏色由綠色自然轉(zhuǎn)為全黃，并 且大小均勻的完好無(wú)損的果實(shí)，用小刀切分為兩瓣，去 核，用液氮快速冷凍，置于－20 ℃冰箱備用。 標(biāo)準(zhǔn)品：全反式-β-胡蘿卜素（UV≥97%）、全 反式-β-隱黃素（HPLC≥97%）、全反式-α-胡蘿卜素（HPLC≥98%），甲基叔丁基醚（methyl tert-butyl ether，MTBE）、甲醇（均為色譜純） 美國(guó)Sigma 公司；丙酮、石油醚、抗氧化劑2,6-二叔丁基-4-甲基苯 酚（2,6-ditertbutyl-4-methylphenol，BHT）、無(wú)水硫酸鈉 （均為分析純） 天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

TGL-16G高速冷凍離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠； KQ-300DE數(shù)控超聲波清洗器 江蘇昆山舒美超聲儀器有限 公司；FA2104N電子天平 上海民橋精密科學(xué)儀器有 限公司；InertsilC30色譜柱 日本島津（中國(guó)）公司； N-1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海愛朗儀器有限公司；Triple Quad LC/MS 6410 HPLC-DAD-APCI-MS聯(lián)用儀（HPLC 儀、真空脫氣機(jī)、四元梯度洗脫泵、柱溫箱、DAD、三 重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀、APCI離子源） 美國(guó)安捷倫科 技公司。

1.3 方法

1.3.1 類胡蘿卜素的提取

用液氮快速冷凍已去核杏果并研磨至粉末，精確稱 取10?g至磨口錐形瓶中，加入85%丙酮溶液150?mL（含 0.1%?BHT）避光超聲浸提15?min，重復(fù)浸提至殘?jiān)鼰o(wú)色 后合并浸提液，離心15?min（4 ℃、8?000?r/min），將上 清液收集于分液漏斗中，加500?mL石油醚進(jìn)行萃取，待 分層后分流水相，有機(jī)相用盛有40?g無(wú)水硫酸鈉的漏斗 收集至圓底燒瓶中，真空25 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，流動(dòng)相復(fù) 溶最終產(chǎn)物并定容至5?mL棕色容量瓶，低溫避光保存待 用，進(jìn)樣前使用0.22?μm有機(jī)濾膜過(guò)濾。

1.3.2 類胡蘿卜素的HPLC-DAD-APCI-MS定性分析

HPLC條件參照Huang?Wenshu和Etzbach等的方 法，并略作改進(jìn)。流動(dòng)相A為甲醇-MTBE-水（81∶15∶4， V/V），流動(dòng)相B為甲醇-MTBE-水（7∶90∶3，V/V）， AB相中分別含0.1%?BHT；流速1?mL/min；線性梯度洗 脫，B相在0～100?min內(nèi)體積分?jǐn)?shù)由0%增至100%；C30 色譜柱（4.6?mm×250?mm，5?μm）；進(jìn)樣量10?μL； 柱溫3 0 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)450?nm；DAD光譜收集范圍 300～500?nm。 MS條件：APCI正離子源；MRM掃描；質(zhì)譜流速 1?mL/min；干燥氣體流速4 L/min；毛細(xì)管電壓2 500 V； 霧化氣壓力30 psi；汽化溫度350 ℃；蒸汽溫度320 ℃； 電暈電流4?μA。

1.3.3 庫(kù)買提杏中類胡蘿卜素的定量分析

采用1.3.2節(jié)HPLC條件，有標(biāo)準(zhǔn)品的全反式類胡蘿卜 素組分，采用外標(biāo)法定量分析類胡蘿卜素，順式類胡蘿 卜素組分無(wú)標(biāo)準(zhǔn)品，但其消光系數(shù)與全反式相似，故根 據(jù)替換計(jì)算法：采用對(duì)應(yīng)的全反式類胡蘿卜素曲線方程對(duì)類胡蘿卜素的異構(gòu)體進(jìn)行定量，結(jié)果以庫(kù)買提杏干 質(zhì)量計(jì)算（μg/g）。

2 結(jié)果與分析

本研究綜合類胡蘿卜素HPLC、MS及光譜信息， 并結(jié)合文獻(xiàn)對(duì)庫(kù)買提杏中主要類胡蘿卜素組分進(jìn)行鑒定 分析。由于類胡蘿卜素異構(gòu)體間分子質(zhì)量相同，僅根據(jù)質(zhì) 譜圖無(wú)法判別其歸屬，還需結(jié)合其紫外-可見光譜特征、 HPLC洗脫順序及相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行鑒定。首先獲取到每 個(gè)組分的質(zhì)譜信息，明確分子質(zhì)量后，再結(jié)合光譜特 征判斷歸屬，國(guó)內(nèi)外研究中，廣泛采用Q值作為異構(gòu) 體光譜特征的判定依據(jù)。根據(jù)前人研究結(jié) 果，在同一流動(dòng)相中越早洗脫出的順式異構(gòu)體，其順 式雙鍵的位置越靠近分子中心，順式峰吸收強(qiáng)度越大 （Q值越大），為中心異構(gòu)體的概率越大，并且15-或 13-順-β-胡蘿卜素具有約在340?nm波長(zhǎng)處存在強(qiáng)吸收峰的特點(diǎn)。結(jié)合峰4出峰順序特征及光譜特征：峰4在β-胡 蘿卜素的異構(gòu)體中HPLC最早出峰，具有最大Q值，且在340?nm波長(zhǎng)處有順式吸收峰，再結(jié)合其最大吸收波 長(zhǎng)，可判定峰4為中心異構(gòu)體：15-順式-β-胡蘿卜素；由 β-胡蘿卜素異構(gòu)體的洗脫規(guī)律可知：13-和15-順式異 構(gòu)體均在全反式之前出峰，9-順式異構(gòu)體在全反式之后 出峰，結(jié)合Q值及光譜信息，可判定峰5為13-順式-β-胡蘿 卜素，峰8為9-順式-β-胡蘿卜素。

3 結(jié) 論

庫(kù)買提杏中主要的全反式類胡蘿卜素為β-胡蘿卜素 （114?μg/g），其次為α-胡蘿卜素（8.3?μg/g），含少量 β-隱黃素（5.4?μg/g）；主要的順式類胡蘿卜素異構(gòu)體為 β-胡蘿卜素異構(gòu)體（9-順式、13-順式和15-順式）和β-隱 黃素異構(gòu)體（13-順式和15-順式）。其中9-順式-β-胡蘿卜 素含量高達(dá)18.8?μg/g，是庫(kù)買提杏中含量最高的順式類 胡蘿卜素。