1 引 言

隨著現(xiàn)代社會生活壓力的逐漸增大, 越來越多人面 臨性欲減弱、易疲勞的困擾, 因此, 改善陽虛、緩解疲勞 類保健食品及中成藥的市場需求日益增長。然而, 一些不 法商家為了吸引消費者以牟取暴利, 在改善陽虛、緩解疲 勞的保健食品及中成藥中隨意添加短期內(nèi)見效快、副作用 大的西藥, 而且非法添加的藥物劑量隨意。消費者長 期、超量服用含有壯陽或緩解疲勞類藥物的保健食品或中成藥, 會引起毒性反應(yīng), 嚴(yán)重甚至危及生命。

2 材料與方法

2.1 材料、儀器與試劑

市售瑪卡含片樣品 A 和 B。 Waters UPLC-Xevo TQ 超高效液相色譜-三重四極桿 質(zhì)譜聯(lián)用儀(電噴霧離子源 ESI 和 Masslynx 4.1 工作站); KQ-300 超聲波清洗儀器(昆山舒美公司); MS-TS 分析天 平(瑞士梅特勒-托利多公司); Milli-Q 超純水器(默克密理 博公司); MS3 渦旋混合器(德國 IKA 公司); C18 固相萃取 柱、SAX 固相萃取柱、WCX 固相萃取柱(60 mg/3mL) (上海安譜公司)。 對照品偽伐地那非(CAS: 224788-34-5)、羥基豪莫西地 那非(CAS: 139755-85-4)、豪莫西地那非(CAS: 642928-07-2)、 硫代艾地那非 (CAS: 856190-47-1) 、那紅地那非 (CAS: 949091-38-7)、那莫西地那非(CAS: 371959-09-0)、鹽酸育亨 賓(CAS: 65-19-0)、氨基他達(dá)那非(CAS: 385769-84-6)、紅地那 非(CAS: 831217-01-7)、西地那非(CAS: 139755-83-2)、伐地那 非(CAS: 224789-15-5)、甲磺酸酚妥拉明(CAS: 65-28-1)、他達(dá) 那非(CAS: 171596-29-5)、巰基西地那非(CAS: 479073-79-5)、 去乙基伐地那非(CAS: 448184-46-1)、N-去甲基西地那非(CAS: 139755-82-1)、二甲基西地那非(CAS: 1416130-63-6)、格列齊 特 (CAS: 21187-98-4) 、二乙氨基前他達(dá)拉非 (CAS: 1588526-67-3)、羥基伐地那非(CAS: 224785-98-2)(純度均大于 98%, 德國DR.E 公司); 甲醇、甲酸、乙腈(色譜純, 德國Merck 公司)。

2.2 實驗方法

2.2.1 對照品溶液配制

分別稱取偽伐地那非、羥基豪莫西地那非、豪莫西地 那非、硫代艾地那非、那紅地那非、那莫西地那非、鹽酸 育亨賓、氨基他達(dá)拉非、紅地那非、西地那非、伐地那非、他達(dá)那非、巰基西地那非、去乙基伐地那非、N–去甲基西 地那非、二甲基西地那非、格列齊特、二乙氨基前他達(dá)拉 非、羥基伐地那非和甲磺酸酚妥拉明對照品各 2.5 mg, 超 聲 10 min, 分別加甲醇定容到 25 mL, 制成最終濃度為 0.1 mg/mL 的對照品溶液。

2.2.2 樣品前處理

①提取 精確稱取 5 g 瑪卡含片 A 或 B, 碾細(xì)并過 80 目篩, 用 100 mL 甲醇:水=80:20(V:V)溶液提取 20 min, 過濾, 減壓 濃縮至 5 mL。–20 ℃冰箱靜置 12 h。 ②純化 采用 C18 固相萃取柱進(jìn)行樣品純化。預(yù)先用 5 mL 甲 醇和 5 mL 去離子水活化小柱, 5 mL 待分析樣品以 1 滴/s 的流速過柱。用 10 mL 的去離子水和體積濃度為 95%的甲 醇溶液淋洗。最后用 20 mL 甲醇洗脫, 收集洗脫液 A。 采用 SAX 固相萃取柱進(jìn)行純化。預(yù)先用 5 mL 的去離 子水活化小柱, 洗脫液A以1 mL/min的流速過柱, 用5 mL 水和 5 mL 甲醇分別淋洗柱子, 收集洗脫液 B。再用 15 mL 含 1% HCl 的甲醇溶液洗脫, 收集洗脫液 C。 采用 WCX 固相萃取柱進(jìn)行純化。用去離子水活化 WCX 固相萃取柱, 加入上一步洗脫液 B, 依次加入 3 mL 水和 3 mL 甲醇淋洗, 棄去流出液, 最后用 3 mL 含 5%氨水 的甲醇溶液洗脫, 收集洗脫液 D。 合并 C 和 D 洗脫液, 40 ℃水浴氮氣吹干, 用甲醇溶解 定容至 2 mL, 過 0.22 μm 微孔濾膜。

3 結(jié)果與分析

3.1 色譜條件優(yōu)化

實驗研究了甲醇、乙腈作為流動相對目標(biāo)物質(zhì)出峰時 間的影響。結(jié)果表明, 乙腈出峰時間較快, 也有利于快速 檢測, 因此流動相采用乙腈–水體系。其次, 研究了流動相 添加易揮發(fā)的酸來提高離子化效果, 在流動相 A、B 中分 別添加 0.1%甲酸、0.1%乙酸、0.1%三氟乙酸, 結(jié)果表明, 加 0.1%甲酸和三氟乙酸, 霧化、峰形、分離度、靈敏度較好。 最后, 研究甲酸的添加量對 C18 液相柱分離效果的影 響。流動相中添加 0.01%、0.05%、0.1%、0.5%體積比的 甲酸, 發(fā)現(xiàn)隨著甲酸濃度的增加, 20 種化合物的保留時間 減少且分辨率增大。但是當(dāng)濃度增加到 0.5%以后, 效果變 化降低。因此甲酸添加量為 0.1%, 各個峰在總離子流圖譜 上基本能分開且檢測出。

3.2 質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化

采用 ESI 正離子模式進(jìn)行一級質(zhì)譜掃描, 得到各標(biāo)準(zhǔn) 品母離子峰 M。以各母離子峰作二級質(zhì)譜, 得到碎片子離 子峰 D, 選取 2 個子離子峰 D1 和 D2, 分別與母離子 M 形 成離子對, 然后進(jìn)行 MRM 模式檢測, 并對各質(zhì)譜參數(shù)進(jìn) 行優(yōu)化。 帶*的子離子與其對應(yīng) 的母離子為定量離子對。

4 結(jié) 論

建立了串聯(lián)固相萃取-超高效液相色譜-三重四 極桿串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定改善陽虛和/或緩解疲勞保健食 品中 20 種非法添加物的分析方法。通過對實驗條件進(jìn)行選 擇和優(yōu)化, 確定了固相萃取純化條件、色譜條件、質(zhì)譜條 件, 在 5 min 內(nèi)可以完全分離鑒定 20 種非法添加物。應(yīng)用 固相萃取串聯(lián)法凈化復(fù)雜樣品, 有效減少食品基質(zhì)成分的 干擾, 提高了檢測靈敏度。該方法簡單快捷, 結(jié)果準(zhǔn)確可 靠, 并可節(jié)約大量溶劑, 適用于對該類保健品中非法添加 物的檢測, 為監(jiān)管保健食品及中成藥中非法添加化學(xué)藥物 提供有力的技術(shù)支持。



 

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