杜仲平壓片是由杜仲葉經(jīng)水煎煮、提取加工制 成的片劑，能降血壓，強(qiáng)筋健骨；適用于高血壓、 腰膝酸痛、筋骨痿軟等癥?，F(xiàn)代研究表明，杜仲葉 中的有效活性成分主要包括以綠原酸為代表的苯丙 素類(lèi)、蘆丁為代表的黃酮類(lèi)等化學(xué)成分。綠原酸 是杜仲葉的主要活性成分，具有利膽、抗菌、抗病 毒、降壓等多種藥理作用。蘆丁具有降血壓、降血 脂、抗氧化以及舒張血管等廣泛的生物學(xué)活性 。 杜仲平壓片的生產(chǎn)廠家較多，為保證該藥物治療效 果的穩(wěn)定，需對(duì)該制劑質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格控制。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1260 高效液相色譜儀（配制 DAD 型檢測(cè)器），美國(guó) Agilent 公司；AUW-220D 電子天 平，日本島津公司；KQ-300DE超聲清洗器，昆山舒美超聲儀器有限公司。

1.2 藥物及試劑

綠原酸（批號(hào)：110753-201716，純 度：99.3%）、蘆丁對(duì)照品（批號(hào)：100080-201408， 純度：92.8%），中國(guó)食品藥品檢定研究院；新綠原 酸（批號(hào)：18032403，純度：99.07%），成都曼思特 生物科技有限公司；甲醇、乙腈為色譜純，德國(guó) MERCK公司；其余試劑、試藥均為分析純，水為純 水。17批杜仲平壓片樣品來(lái)源，見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Thermo Hypersil Gold-C18柱 （4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1% 磷酸溶液（B）；梯度洗脫：0～10 min：5%→10%A， 10～20 min： 10% →16% A， 20～30 min： 16% A， 30～35 min： 16% →25% A， 35～45 min： 25% A， 45～45.1 min：25%→5%A，45.1～50 min：5%A；流 速：1.0 mL·min- 1 ；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：354 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液

取杜仲平壓片樣品適量，除去薄 膜衣或糖衣，研細(xì)，取粉末約1 g，精密稱(chēng)定，置錐 形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲30 min，放冷，再次稱(chēng)定質(zhì)量，用 50%甲醇補(bǔ)足減 失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.2.2 混合對(duì)照品溶液

分別精密稱(chēng)取新綠原酸、綠 原酸和蘆丁對(duì)照品適量，用 50%甲醇定容至刻度， 制成濃度分別為38.21、255.61、19.72 μg · mL-1 的對(duì) 照品儲(chǔ)備溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液

按杜仲平壓片處方工藝，制成 只含輔料的陰性樣品。取陰性樣品適量，研細(xì)，按 2.2.1 項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度試驗(yàn)

分別精密吸取同一供試品溶液 （批號(hào)：171510）10 μL，按 2.1 項(xiàng)下色譜條件，連續(xù) 進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。以綠原酸為參照峰（S），計(jì) 算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯 示，相對(duì)保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）值均小于 2%，相對(duì)峰面積RSD值均小于3%，表明儀器精密度 良好。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取同一供試品溶液 （批號(hào)：171510）10 μL，按 2.1 項(xiàng)下的色譜條件，分 別在0、2、6、10、18、24 h進(jìn)樣，記錄色譜圖。以 綠原酸為參照峰（S），計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間 和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯示，相對(duì)保留時(shí)間 RSD 值均 小于 1%，相對(duì)峰面積 RSD 值均小于 3%，表明供試 品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批杜仲平壓片樣品（批 號(hào)：171510），依照2.2.1項(xiàng)下方法平行制備6份供試 品溶液，按2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。以綠原酸為參照峰（S），計(jì)算各共有峰的相對(duì)保 留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯示，相對(duì)保留時(shí)間 RSD 值均小于 2%，相對(duì)峰面積 RSD 值均小于 3%， 表明該方法重復(fù)性良好。


3 討論

在比較了不同色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Waters Sunfire C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）、Thermo Hypersil Gold-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），不同梯度洗脫體系（乙腈水，乙腈-0.5%乙酸溶液，乙腈-0.1%磷酸溶液、甲 醇-0.1%磷酸溶液不同波長(zhǎng)（采用DAD檢測(cè)器 對(duì)供試品溶液進(jìn)行紫外全波長(zhǎng)掃描） 對(duì)指紋圖譜測(cè) 定的影響的基礎(chǔ)上，選擇了本實(shí)驗(yàn)方案，實(shí)驗(yàn)結(jié)果 顯示采用Thermo Hypersil Gold-C18色譜柱、以乙腈0.1%磷酸為流動(dòng)相梯度洗脫、在波長(zhǎng) 354 nm 條件 下，色譜峰信息較為豐富，各特征峰對(duì)稱(chēng)性良好， 吸收較大、分離效果為最好，故最終確定2.1項(xiàng)下的 色譜條件作為杜仲平壓片樣品指紋圖譜測(cè)定的色譜 條件。