葡萄的營養(yǎng)價(jià)值較高且在全世界范圍內(nèi)的種植面積和產(chǎn)量均位居前列，其果實(shí)中含有人體不可或缺 的維生素、礦物質(zhì)、核黃素、硫胺素等[1]，具有生津消食、 緩解疲勞、補(bǔ)血益氣、延年益壽的功效[2-3]。

1 儀器和試劑 

1.1 儀器 

Agilent LC 1100 液相色譜儀：美國 Agilent 公司； AL104 電子分析天平：梅特勒-托利多儀器有限公司； KQ5200 超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；LC-400 低速離心機(jī)：科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公 司；JP200-24 干式氮吹儀：上海旌派儀器有限公司；A－ CO-003 電磁式空氣泵：森森集團(tuán)股份有限公司；GM0.33A 隔膜空氣泵：天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司； LyoQuest-55 冷凍干燥機(jī)：西班牙泰事達(dá)。 

1.2 試劑 

GBW（E）082341 多菌靈、CW：LC-321 吡蟲啉：壇 墨質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；甲霜靈：山東濰坊潤豐化工股 份有限公司；甲醇、乙腈（色譜級(jí)）、鹽酸（分析級(jí)）：山東 禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司；磷酸（分析級(jí)）：天津市 光復(fù)精細(xì)化工研究所；二氯甲烷、石油醚、乙二醇（分析 級(jí)）：天津市富宇精細(xì)化工有限公司；氫氧化鈉、分析級(jí) 丙三醇、苯酚（分析級(jí)）：天津市恒興化學(xué)試劑制造有限 公司；氯化膽堿（分析級(jí)，ChCl）：北京百靈威科技有限 公司；葡萄糖（分析級(jí)）：天津市大茂化學(xué)試劑廠；乳酸 （分析級(jí)）：天津市博迪化工股份有限公司。

2 方法 

2.1 色譜條件 

色譜柱：Venusil MP C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）， 流速：1.0 mL/min，柱溫：30 ℃，檢測波長：280 nm 和 210 nm，進(jìn)樣量：20 μL，流動(dòng)相：甲醇（A）-0.05 % 磷酸 水溶液（B），梯度洗脫條件：0~5 min，10~60（A），5 min~ 18 min，60~86（A）。 

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別精密量取對(duì)照品溶液多菌靈（100 μg/mL）、吡 蟲啉（100 μg/mL）一定體積，配制成 10 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn) 儲(chǔ)備液。精密稱取甲霜靈對(duì)照品 0.01 g 置于 50 mL 容 量瓶中，配制成 200 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備 液均置于-20 ℃環(huán)境下密封保存。 

2.3 加熱法制備低共熔溶劑 

將氫受體和氫供體按照一定的摩爾比準(zhǔn)確稱量 后，在一定溫度下（如表 1）攪拌加熱約 2 h~4 h，直至形 成穩(wěn)定、均一、透亮的溶液，然后冷卻至（20±5）℃即 得。具體條件見表 1。

3 結(jié)果與分析

檢測波長的選擇：通過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，多菌靈和 吡蟲啉在 280 nm 處有較大吸收，而甲霜靈在 210 nm 左右有最大吸收，多菌靈和吡蟲啉雖在 210 nm 處也有 吸收，但由于 210 nm 處末端吸收較多，雜質(zhì)峰較多，故 選擇雙波長檢測。流動(dòng)相的選擇：將標(biāo)準(zhǔn)溶液在流動(dòng)相為甲醇-水 和乙腈-水的條件下分別進(jìn)樣，發(fā)現(xiàn)同樣的方法下選 用乙腈-水時(shí)，多菌靈和吡蟲啉的峰間隔很小，達(dá)不到 分離度的要求，經(jīng)過梯度的調(diào)整仍無法分離，故選擇 甲醇-0.05 %磷酸水溶液作為流動(dòng)相，在此條件下 3 種 農(nóng)藥達(dá)到很好的基線分離，且峰形較好，分離度達(dá)到 1.5 以上。

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