膜莢 黃 芪 Astragalusmembranaceus（Fish.）Bge. 為豆科（Leguminosae）黃芪屬（Astragalus Linn）植物 的干燥根，始記載在《神農本草經》作為黃芪藥 用，列為上品，味甘、性微溫，歸脾、肺經，具有補氣升陽，行滯通痹，利水消腫，托毒排膿等的功效， 臨床上常用于糖尿病、主要分布在甘肅、山西、黑龍江、內蒙古等地。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters-2695 型高效液相色譜儀，2998 型 PDA 檢測器（美國 Waters 公司）；EYELA OSB-2200 型旋 轉蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）；ML104/02 型電子分析天平 （梅特勒-托利多上海有限公司）；昆山舒美KQ500DB 型超聲儀器（昆山市超聲儀器公司）。

1.2 材料

去氫二松柏醇-4-O-β-D-葡萄糖、鼠李檸檬素 3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚 3-O-[6′′-O-（反式對-肉桂?；-β-D-葡糖糖苷、鼠李檸檬素-3-Oβ -新橙皮糖苷對照品，均為實驗室分離得到，鑒定 純度均大于 98.0%；乙腈為色譜純 （美國 Thermo fisher 科技有限公司）；水為屈臣氏蒸餾水；其余實 驗用試劑均為分析純。實驗用 15 批膜莢黃芪葉藥 材的樣品信息見表 2，經黑龍江中醫(yī)藥大學王振月 教授鑒定為膜莢黃芪的干燥葉。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Sunfire C18（4.6mm×250mm, 5μm）；流動 相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0 ~30min, 15%→ 45%A）；檢測波長：266nm；流速為 1.0mL·min -1 ；柱 溫：25℃；各化合物峰理論塔板數(shù)均大于 5000，峰 2 和 3 之間的分離度 R=2（tR3 -tR）2 （/ W2+W3 ）=2（19.82- 18.23）（/ 0.52+0.51）=1.54。混合對照品及膜莢黃芪 葉供試品溶液的 HPLC 色譜圖見圖 1。

2.2 混合對照品溶液的制備

精密稱取各對照品適量，加甲醇定容，配制成 含有去氫二松柏醇-4-O-β-D-葡萄糖 0.1814mg·mL-1 、 鼠李檸檬素-3-O-β-新橙皮糖苷 0.2252mg·mL-1 、 山奈酚 3-O-[6′′-O-（反式-對-肉桂?；-β-D葡糖糖苷 0.1596mg·mL-1 、鼠李檸檬素 3-O-β-D-葡 萄糖苷 0.4812mg·mL-1 的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

稱取適量膜莢黃芪葉粉碎，過 50 目篩，精密稱 取其粉末 5.0g，置于 100mL 具塞錐形瓶中，加入甲 醇 50mL，稱重，加熱回流 2h，冷卻后，再次稱重，甲 醇補足減失重量，混勻過濾，減壓回收甲醇，殘渣用 甲醇溶解，轉移至 10mL 容量瓶，加甲醇定容，搖勻， 即得供試品溶液。進樣前用 0.22μm 微孔濾膜濾過。

3 討論

3.1 波長的選擇

通過 PDA 檢測器，對混合對照品溶液在 190~ 400nm 處進行紫外全波長掃描，去氫二松柏醇-4- O-β-D-葡萄糖在 276nm 處有最大吸收，鼠李檸檬 素-3-O-β-新橙皮糖苷、山奈酚 3-O-[6′′-O-（反 式-對-肉桂?；-β-D-葡糖糖苷在 271nm 處有 最大吸收，鼠李檸檬素 3-O-β-D-葡萄糖苷在 267nm 處有最大吸收，綜合比較在 266，267，271，276，254， 300，365nm 各波長下峰強度、保留時間后，4 種化合 物在 266nm 波長下干擾較少，靈敏度高，選擇 266nm 作為檢測波長。

3.2 色譜條件的選擇

試驗考察了乙腈-水和甲醇-水分別作為流動相梯度洗脫，發(fā)現(xiàn)乙腈-水作為流動相較甲醇-水保 留時間穩(wěn)定，色譜峰峰形較好，因此選擇乙腈-水作 為流動相，梯度洗脫。試驗選擇 30min 的梯度洗脫 時間，使各色譜峰達到較好分離。 3.3 含量測定 膜莢黃芪葉富含黃酮類化合物。本試驗以膜莢 黃芪葉 1 種木脂素類化合物和 3 種黃酮類化合物 為指標，運用 HPLC-PDA 法建立其含量測定，試驗中選取黑龍江和內蒙古不同產地不同批次的膜莢 黃芪葉樣品，研究結果顯示黑龍江不同產地和批次 的膜莢黃芪葉中 4 種化合物的含量差別較大，內蒙 古產地的膜莢黃芪葉中去氫二松柏醇-4-O-β-D葡萄糖和鼠李檸檬素-3-O-β-葡萄糖苷含量較黑 龍江不同產地的含量低，但是黑龍江不同產地的膜 莢黃芪葉均含有去氫二松柏醇-4-O-β-D-葡萄糖、 鼠李檸檬素-3-O-β-新橙皮糖苷、山奈酚 3-O-[6′′ -O-（反式-對-肉桂?；-β-D-葡糖糖苷和鼠李 檸檬素 3-O-β-D-葡萄糖苷，其中綏芬河中4種成分含量較其他產地高，其他產地 4 種成分含量相差 較小。這可能與地域相近有關。

4 結論

建立了具有穩(wěn)定、準確、便捷等特點的 HPLC-PDA 方法，同時測定了膜莢黃芪葉中 4 種化合物，其中 1 種為木脂素類化合物，3 種為黃酮類化 合物，首次同時測定不同產地膜莢黃芪葉中去氫二 松柏醇-4-O-β-D-葡萄糖、鼠李檸檬素 3-O-β-D葡萄糖苷、山奈酚 3-O-[6′′-O-（反式-對-肉桂酰 基）]-β-D-葡糖糖苷和鼠李檸檬素-3-O-β-新橙皮 糖苷 4 種化學成分的含量，為膜莢黃芪葉的黃酮類 和木脂素類化合物的質量控制提供了理論基礎。



 

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