參麥注射液由古方生脈飲衍變而來，處方由紅參 和麥冬等藥材構(gòu)成。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，參麥注射液具有 益氣固脫和養(yǎng)陰生津的功效；現(xiàn)代藥理學(xué)證實，參麥 方劑具有抗心肌缺血、去除氧自由基等藥理學(xué)功效， 臨床上被廣泛用于心血管疾病、免疫功能低下及各種 慢性疾病治療 。

1　儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫 1290 infinity 超高效液相色譜儀（包含四元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱和 DAD 檢測器， 安捷倫科技公司）；MS105DU 型電子天平（0.01 mg 梅特勒 - 托利多（常州）測量技術(shù)有限公司）；昆山舒美KQ300DA型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 試藥

參麥注射液由杭州正大青春寶有限公司提供 （批號 1706271、1611071、1611081、1611082，規(guī)格 10 mL·支 -1，每 1 mL 含紅參 0.1 g）。 對照品人參皂苷 Rg1 （批號 Z26S7X21730）、人參 皂苷 Re（批號 B10M8S35243）、人參皂苷 Rf（批號 P09M8F31017）、20（S）-人參皂苷 Rh1 （批號 Z12M8X35790） 、20（S）- 人參皂苷 Rg2 （批號 M27N8S49074）、人參 皂苷 Rb1 （批號 Z06M8L30693）、人參皂苷 Rc（批號 P24F8F30057）、人參皂苷 Rb2 （批號 P09M8F35575）、 人參皂苷 Rd（批號 Z27F8X30060）、20（S）- 人參皂 苷 Rg3 （批號 Z01D7X25885）含量均為 98%，均購于 上海源葉生物科技有限公司。 乙 腈（色 譜 純）和 超 純 水（色 譜 純）購 自 默 克 公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Aglient Eclipse Plus C18（ 2.1 mm×50 mm， 1.8 μm）；乙腈（A）- 水（B）為流動相，采用二元梯度 洗脫（0~10 min，19%A；10~32 min，19%A → 28%A，32~39 min，28%A → 36%A，39~49 min，36%A → 45%A），流速 0.3 mL·min-1；柱溫 30 ℃ ；檢測波長 203 nm；進樣量 1 μL。

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品儲備液

精密稱取對照品人參皂苷 Rg1 3.80 mg、人參皂苷 Re 2.20 mg、人參皂苷 Rf 0.99 mg、20（S）- 人參皂苷 Rh1 0.19 mg、20（S）- 人參皂 苷 Rg2 0.22 mg、人參皂苷 Rb1 6.26 mg、人參皂苷 Rc 2.68 mg、人參皂苷 Rb2 2.34 mg、人參皂苷 Rb3 0.31 mg、人參皂苷 Rd 1.30 mg、20（S）- 人參皂苷 Rg3 0.28 mg，分別置 1 mL 量瓶中，加 20% 乙腈水溶解并稀釋 至刻度，制成單一對照品儲備液。

2.2.2 混合對照品溶液

分別精密吸取上述單一對 照品儲備液人參皂苷 Rg1 761 μL、人參皂苷 Re 441 μL、人參皂苷 Rf 499 μL、20（S）- 人參皂苷 Rh1 192 μL、20（S）- 人參皂苷 Rg2 221 μL、人參皂苷 Rb1 782 μL、人參皂苷 Rc 536 μL、人參皂苷 Rb2 470 μL、人參皂 苷 Rb3 310 μL、人 參 皂 苷 Rd 654 μL、20（S）- 人 參皂苷 Rg3 285 μL，置 10 mL 量瓶中，加初始比例流 動 相 至 刻 度，制 成 人 參 皂 苷 Rg1、Re、Rf、Rh1、Rg2、 Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Rg3 的質(zhì)量濃度分別為 0.380、 0.220、0.099、0.019、0.022、0.626、0.268、0.234、 0.031、0.130、0.028 mg·mL-1 的混合對照品儲備液。

2.2.3 供試品溶液

取參麥注射液，過 0.22 μm 微孔 濾膜，收集續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性和專屬性試驗

分別取流動相溶液 （空白對照）、混合對照品溶液和供試品溶液，按“2.1” 項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，見圖 1。結(jié)果顯 示，混合對照品溶液與供試品溶液中各指標(biāo)成分色譜 峰的理論塔板數(shù)均大于 5 000，分離度均大于 1.5，拖尾 因子在 0.9~1.0 之間，表明系統(tǒng)適用性良好。在樣品色 譜圖中，分別有與對照品保留時間一致的特征峰，表明各化合物之間分離度好，無干擾，專屬性良好。

2.3.2 線性關(guān)系考察

精 密 吸 取“2.2.2”項 下 混 合對照品儲備液 0、0.8、0.5、0.4、0.25 mL，分 別置 1 mL 量 瓶 中，加 流 動 相 定 容，搖 勻，即 得 系 列 濃度的的混合對照品溶液。在上述色譜條件下進樣測定，以測定的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)對照 品 的 濃 度 為 橫 坐 標(biāo)（X），繪 制 標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線。 結(jié) 果 11個成分的線性關(guān)系良好，回歸方程和相關(guān)系數(shù)見 表 1。

2.3.3 精密度試驗

精密吸取“2.2.2”項下混合對照 品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進樣 6 次，記錄峰面積。 結(jié)果顯示，11 個人參皂苷峰面積的 RSD 均小于 2%， 說明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗

取參麥注射液樣品，按“2.2.2”項 下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件分別于 0、2、 4、8、12、24 h 進樣分析，11 個人參皂苷峰面積的 RSD 均小于 3%，表明供試品溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗

取同一批次的參麥注射液，平行 制備 6 份供試品溶液，進樣測定并計算各人參皂苷成分含量。結(jié)果顯示，樣品中人參皂苷 Rg1、Re、Rf、Rh1、 Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Rg3 平均含量分別為 0.136 8、0.081 3、0.040 1、0.097 6、0.098 8、0.179 7、0.096 5、 0.083 5、0.012 7、0.052 3、0.012 6 mg·mL-1，RSD 分別為 0.44%、0.57%、2.2%、1.2%、1.3%、0.33%、1.8%、1.1%、 4.2%、0.52%、3.9%，表明該方法重復(fù)性良好。 2.3.6 加樣回收率試驗 取已知含量的供試品溶液 （批號 1706271）0.5 mL，按已知含量的 100% 水平加 入混合對照品 0.5 mL，充分混勻，平行制備 6 份，過 0.22 μm 微孔濾膜后，進樣測定。

3 討論

3.1 色譜條件的優(yōu)化

考察了不同流動相系統(tǒng)（乙腈 - 水、0.05% 磷酸 二氫鉀緩沖鹽 - 乙腈等）對分離效果的影響，同時考 察不同柱溫（20、25、30、35、40 ℃）和流速（0.1、0.2、 0.3、0.4、0.5 mL·min-1）對分離度的影響，結(jié)果顯示，柱 溫 30 ℃，流速為 0.3 mL·min-1 時各色譜峰分離度最 優(yōu)，并且能保持柱壓在合理范圍內(nèi)；考察了進樣量對 分離度的影響，結(jié)果進樣量為 1 μL 時峰形最佳，大于 1 μL 時，色譜峰峰形不好，小于 1 μL 時，峰面積太小影 響積分。綜合考慮，最終確定了“2.1”項的色譜條件。

3.2 與 HPLC 比較

本實驗采用 1.8 μm 小顆粒填料色譜柱，相比于 HPLC 使用的常規(guī)色譜柱，這一基于小粒徑的分析法 具有更高的效率、更佳的數(shù)據(jù)質(zhì)量，能夠顯著地縮短 分析時間，45 min 內(nèi)即可同時測定參麥注射液中 11 個成分。同時，在保證所測定皂苷成分含量結(jié)果一致的情況下，時間節(jié)省了近 50 min。

4 結(jié)論

近年來，隨著人們對傳統(tǒng)中藥的安全及質(zhì)量需求 的不斷提升，企業(yè)對中藥質(zhì)量控制的加速投入，藥品 分析檢測的工作量急劇增加，也帶來了提升分析檢測 效率的現(xiàn)實需求。本實驗采用 UHPLC，可在 45 min 內(nèi)對參麥注射液中 11 個活性成分同時進行測定，方法穩(wěn)定可靠，操作簡單，為快速全面控制中藥注射劑 提供了實驗依據(jù)。