絞股藍(lán)為葫蘆科絞股藍(lán)屬植物，具有清肺化痰、補(bǔ) 氣生津、健脾安神等功效，其化學(xué)成分復(fù)雜，主要包 括皂苷類、多糖類、黃酮類、氨基酸、微 量元素等多種成分，主要活性成分為皂苷類。 現(xiàn)代藥理研究表明絞股藍(lán)具有降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬 化等作用。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent 1260 液相色譜( 配有 G1311C 型四 元梯度泵，G1329B 型自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A 型柱溫箱， G4212B 型 DAD 檢測(cè)器; Agilent Technologies，美國(guó)) ; XP-205 電 子 天 平 ( 瑞 士 Mettler Toledo 公 司，感 量: 0．01 mg) ; 昆山舒美KQ-800KDE 超聲儀( 中國(guó)昆山市超聲儀器有限公司) ; Milli-Q 超純水處理系統(tǒng)( 美國(guó) Millipore) 。

1．2 試藥

乙腈( 色譜純，批號(hào): 165741，美國(guó) Fisher 公司) ; 實(shí)驗(yàn)室用水為超純水; 絞股藍(lán)皂苷 A 對(duì)照品 ( 批號(hào): drk-1392-911223，成都德銳可生物科技有限公 司，含 量: 98． 0%) ; 人 參 皂 苷 Ｒb1 ( 批 號(hào): 110704- 200318) ，人參皂苷 Ｒb3( 批號(hào): 111686-200501) ，人參 皂苷 Ｒg1( 批號(hào): 110703-200424) ，人參皂苷 Ｒd( 批號(hào): 111818-201603) ，均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供;絞股藍(lán)總苷分散片( 亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批 號(hào): 160702，160901，161101，規(guī)格: 每片含絞股藍(lán)總苷 60 mg) ; 羥丙基纖維素( 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司， 批號(hào): 20151020) ; 羧甲基淀粉鈉( 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑 有限公司，批號(hào): 20150311) ; 硬脂酸鎂( 營(yíng)口市第二制 藥廠生產(chǎn)，北京市燕京制藥廠分裝，批號(hào): 20000609) 。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱: Alltima C18色譜柱( 150 mm× 4．6 mm，5 μm) ; 流 動(dòng) 相: 乙 腈-水 ( 31 ∶69) ; 流 速: 1．0 mL·min－1 ; 檢測(cè)波長(zhǎng) 210 nm; 進(jìn)樣體積: 20 μL; 柱 溫為 30 ℃。樣品進(jìn)樣前均經(jīng)過(guò)孔徑 0．22 μm 尼龍濾 膜濾過(guò)。

2．2 對(duì)照品溶液的制備

取絞股藍(lán)皂苷 A 對(duì)照品 16．5 mg，精密稱定，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇適量，超 聲使溶解并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為絞股藍(lán)皂苷 A 儲(chǔ)備液( 0．33 mg·mL－1 ) 。精密量取絞股藍(lán)皂苷 A 儲(chǔ) 備液 1，2，3，4，5 mL 于 10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋成濃 度約為 33，66，99，132，165 μg·mL－1 的絞股藍(lán)皂苷 A 對(duì) 照品溶液。中間濃度的對(duì)照品溶液用作含量測(cè)定。

2．3 供試品溶液及陰性對(duì)照溶液的制備

取本品 20 片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取粉末適量( 相當(dāng)于絞股 藍(lán)總苷 40 mg) ，置 10 mL 量瓶中，加甲醇適量，超聲 10 min，甲醇定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。分 別稱取藥品說(shuō)明書中記錄的輔料羥丙基纖維素、羧甲 基淀粉鈉、硬脂酸鎂各 0．1 g，置于 10 mL 量瓶中，同法 操作，配制不含絞股藍(lán)總苷的陰性對(duì)照溶液，用于專屬 性實(shí)驗(yàn)。

2．4 專屬性實(shí)驗(yàn)和系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)

分別進(jìn)樣分析 陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液，結(jié)果見圖 1，樣品中其他成分和制劑輔料不干擾絞股藍(lán)皂苷 A 的測(cè)定。理論板數(shù)按絞股藍(lán)皂苷 A 計(jì)算不低于 3000。供試品溶液中主峰純度檢測(cè)閾值設(shè)定為 990，應(yīng)符合 規(guī)定。

2．5 線性關(guān)系考察

取“2．2”項(xiàng)對(duì)照品溶液分別進(jìn) 樣，記錄色譜圖，以濃度( μg·mL－1 ) 為橫坐標(biāo)，峰面積 為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。得到線性方程為 Y = 6．31X－ 7．95，r = 1．000 0，說(shuō)明絞股藍(lán)皂苷 A 濃度在 32． 69 ～ 163．46 μg·mL－1 內(nèi)與峰面積呈良好線性相關(guān)。將對(duì) 照品溶液逐級(jí)稀釋，在信噪比( S /N) 約為 10．0 時(shí)測(cè)得 定量限為 0．098 μg·mL－1 ，在 S /N 約為 3．0 時(shí)測(cè)得檢 測(cè)限為 0．033 μg·mL－1 。

2．6 精密度和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取中間濃度的對(duì)照品溶 液連續(xù)進(jìn)樣 6 次，記錄絞股藍(lán)皂苷 A 峰面積，峰面積 的 ＲSD 為 0．36%( n = 6) ，說(shuō)明儀器精密度良好。對(duì)供 試品溶液( 批號(hào): 160702) 分別于 0，2，4，8，12，24 h 進(jìn) 樣分析，峰面積的 ＲSD 為 0．85%( n = 6) ，表明供試品 溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2．7 重 復(fù) 性 實(shí) 驗(yàn)

取絞股藍(lán)總苷分散片 ( 批 號(hào): 160702) 制備供試品溶液 6 份，分別進(jìn)樣分析，計(jì)算得 到絞股藍(lán)皂苷 A 含量，含量的 ＲSD 為 1．9%( n = 6) ，說(shuō) 明方法的重復(fù)性良好。

2．8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取樣品( 批號(hào): 160702， 平均片質(zhì)量為 0．465 6 g) 粉末 6 份，分別精密加入絞股 藍(lán)皂苷 A 儲(chǔ)備液 1．5 mL，按照“2．3”項(xiàng)下供試品溶液 的制備方法制得各加樣供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加 樣回收率和 ＲSD，結(jié)果平均回收率為 97． 2%，ＲSD = 1．5%。見表 1。

2．9 樣品含量測(cè)定

應(yīng)用本文建立的方法對(duì) 3 批絞 股藍(lán)總苷分散片進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品制備 3 份，取平均 值，測(cè)得批號(hào)為 160702，160901，161101 的樣品中絞股 藍(lán)皂苷 A 的含量分別為 4．05，3．88 和 3．21 mg·g－1 ，說(shuō) 明絞股藍(lán)總苷分散片生產(chǎn)工藝穩(wěn)定。



3 討論

3．1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取絞股藍(lán)皂苷 A 的對(duì)照品溶液

在 200～400 nm 范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)紫外光譜掃描， 結(jié)果顯示絞股藍(lán)皂苷 A 呈現(xiàn)末端吸收，故選用 210 nm 作為絞股藍(lán)皂苷 A 的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3．2 提取方式的選擇

分別考察 60%甲醇溶液、80% 甲醇溶液以及甲醇作為提取溶劑時(shí)提取效率，結(jié)果表 明，甲醇的提取效率最高，故選擇甲醇為提取溶劑; 提 取時(shí)間分別考察超聲 10，20 和 30 min，結(jié)果表明超聲 提取 10 min 即可將樣品中絞股藍(lán)皂苷 A 提取完全。

3．3 流動(dòng)相的選擇

考察甲醇-水、 乙腈-水、乙腈-磷酸水等不同流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)以甲醇作為 有機(jī)相時(shí)基線漂移相對(duì)嚴(yán)重，末端吸收干擾較強(qiáng); 以乙 腈作為有機(jī)相時(shí)基線相對(duì)平穩(wěn)，分離效果好，在水相中 加入磷酸溶液調(diào)節(jié) pH 值，則對(duì)絞股藍(lán)皂苷 A 的峰型 影響不大，所以選擇乙腈-水為流動(dòng)相。

3．4 專屬性實(shí)驗(yàn)

本實(shí)驗(yàn)考察絞股藍(lán)總皂苷中已有 含量測(cè)定研究報(bào)道的皂苷類成分，對(duì)絞股藍(lán)皂苷 A 含 量測(cè)定的干擾，在本實(shí)驗(yàn)條件下，絞股藍(lán)皂苷 A 與人參 皂苷 Ｒb1、人參皂苷 Ｒb3、人參皂苷 Ｒg1、人參皂苷 Ｒd 的分離度均大于 1．5，說(shuō)明上述成分不會(huì)干擾絞股藍(lán)皂 苷 A 的含量測(cè)定。 本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法建立絞股藍(lán)總苷分散片中有效成分絞股藍(lán)皂苷 A 含量測(cè)定方法，該方法操 作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可為絞股藍(lán)總苷分散片以及含 有絞股藍(lán)總皂苷的其他制劑的質(zhì)量控制提供參考。