跌打丸是由三七、當(dāng)歸、白芍、赤芍、桃仁、紅花、血竭等 24 味中藥飲片經(jīng)粉碎、蜜制而成的大處方蜜丸制劑，收 載于《中華人民共和國藥典》2015 年版一部。具有活血散 瘀，消腫止痛的功效，用于跌打損傷，筋斷骨折，瘀血腫痛， 閃腰岔氣等。組方中的紅花被檢出非法染色劑事件已 有報(bào)道，而金橙Ⅱ就是常用的染色劑之一。金橙Ⅱ又名酸 性橙Ⅱ、二號橙、桔黃橙、酸性金黃Ⅱ或酸性艷橙 GR，俗名 金黃粉，是一種化工染料，主要用于皮革、紡織物染色。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

在甘肅省 2018 年評價(jià)性抽驗(yàn)工作中，共收到省內(nèi) 16 個縣跌打丸樣品（市、區(qū)）24 批次，均為大蜜丸，被抽樣單 位涉及經(jīng)營單位 14 個，醫(yī)療機(jī)構(gòu) 10 個，樣品來自國內(nèi) 4 家生產(chǎn)企業(yè)。

1.2 儀器與試藥

島津 UFLC -20ADXR 高效液相色譜儀 （日本島津公司，PDA 檢測器）；MS205DU 電子天平（上海梅特勒托利多儀器有限公司）；KQ 250DB 超聲清洗器（昆山舒美超聲儀器有限公司）；Dura 12V 型超純水機(jī)（美國 The Lab 澤拉布 公司）。金橙Ⅱ?qū)φ掌焚徲谥袊称匪幤窓z定研究院，批 號：111769-201302；乙腈為色譜純試劑；水為本實(shí)驗(yàn)室制 備的超純水；其余試劑均為分析純。

1.3 檢驗(yàn)依據(jù)

在國家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方 法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件（2014005）的基礎(chǔ)上，對洗脫條件進(jìn) 行調(diào)整，最終實(shí)現(xiàn)跌打丸中金橙Ⅱ的檢測。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱 Phenomenex Gemini C18 色譜柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），流動相：0.02 mol/L 醋酸銨溶液（A）-乙腈（B），洗 脫梯度見表 1。流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL，檢測波長： 484 nm；柱溫：35 ℃。理論板數(shù)按金橙Ⅱ峰計(jì)算不低于 2 000。

2.2 對照品溶液的制備

精密取金橙Ⅱ?qū)φ掌愤m量，加乙醇制成每 1 mL 約含 金橙Ⅱ10 μg 的儲備液；精密量取儲備液 5 mL 于 100 mL量瓶中，加乙醇至刻度，混勻，即得對照品溶液（每 1 mL 含金橙Ⅱ0.465 0 μg）。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 陰性供試品溶液的制備

取本品 3 丸，剪碎，加 4.5 g 硅藻土，研勻，取約 4.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶 中，精密加 10 mL 乙醇，超聲處理（功率 250 W，頻率 40 kHz） 20 min，冷即至室溫，取上清液過濾，濾液即得。

2.3.2 陽性供試品溶液的制備

因跌打丸中均未檢出金 橙Ⅱ，所以采用標(biāo)準(zhǔn)加入法制備陽性樣品，分別精密量取 陰性供試品溶液 1.0 mL 和對照品儲備溶液 0.3 mL，混勻 即得。

2.4 專屬性試驗(yàn)

精密量取對照品溶液、陽性供試品溶液和陰性供試品 溶液各 10 μL，分別按原標(biāo)準(zhǔn)色譜條件和本試驗(yàn)“2.1”項(xiàng) 下色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果顯示，本試驗(yàn)優(yōu)化后的色譜條 件明顯優(yōu)于原標(biāo)準(zhǔn)色譜方法，而且陽性樣品呈現(xiàn)與對照品 保留時間相同的色譜峰，無其他雜峰干擾，陰性樣品則無 對照品相對應(yīng)的色譜峰，見圖 1。


3 討論

本次抽檢的跌打丸劑型均為大蜜丸，在前處理中比較 了加硅藻土和不加硅藻土的區(qū)別，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不加硅藻土直 接乙醇超聲處理 30 min 內(nèi)樣品呈現(xiàn)塊狀，不易分散；而加 入硅藻土能提前分散樣品，大大減少樣品溶液的沉淀時 間，上清液也比較容易過濾。考察了提取溶劑，嘗試 70% 乙醇、乙醇、甲醇作為溶劑分別提取，結(jié)果表明用乙醇提取 最為完全。跌打丸組方藥味多，各化學(xué)成分極性差別較大，按照 原標(biāo)準(zhǔn)洗脫條件進(jìn)行洗脫難以分離。本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)， 分別考察了乙腈-水，乙腈-0.02 mol/L 醋酸銨溶液不同比 例，對梯度時間進(jìn)行了研究調(diào)整，最終確定了本試驗(yàn)條件。中成藥是以中藥飲片為原材料加工的，所以中藥飲片 是否染色也就關(guān)乎中成藥的質(zhì)量。本試驗(yàn)為生產(chǎn)企業(yè)測定 非法染色劑金橙Ⅱ的含量提供了參考依據(jù)。