復(fù)方感冒靈顆粒由山銀花、五指柑、野菊花、 三叉苦、南板藍根、崗梅 6 味中藥，以及對乙酰氨基酚、咖啡因、馬來酸氯苯那敏 3 種西藥組成的中 西藥復(fù)方制劑，用于治療風(fēng)熱感冒及溫病之發(fā)熱、微惡風(fēng)寒、頭身痛、口干而渴、鼻塞涕濁、咽喉紅 腫疼痛、咳嗽、痰黃黏稠，療效確切，市場需求量 大，現(xiàn)有藥品標準 ( 國家食品藥品監(jiān)督管理總局 國家藥品標準 WS3-B-2384-97-2017) 定性采用 TLC 法鑒別其中對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏，滴定 法測定對乙酰氨基酚含有量，但對中藥相關(guān)質(zhì) 量控制與藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的闡釋仍為空白，導(dǎo)致質(zhì)量 有差異，藥效不穩(wěn)定，成為制約相關(guān)產(chǎn)業(yè)發(fā)展亟待 解決的問題。

1 材料

1. 1 儀器

Agilent 1290 型高效液相色譜系統(tǒng)，配 置 6530Accurate-Mass Q-TOF-LC-MS /MS、Qualitative Analysis B． 05. 00 色譜處理軟件 ( 美國安捷倫科技 公司) ; KQ5200DE 型數(shù)控超聲波清洗器 ( 昆山舒美市超聲儀器有限公司) ; XPE105 型 電 子 分 析 天 平 ( 瑞士 Mettler-Toledo 公司) 。

1. 2 試 藥

對 乙 酰 氨 基 酚 ( 批 號 100018- 201409) 、咖啡因 ( 批號 171215-201211) 、綠原酸 ( 批號 110753-201716) 、原兒茶酸 ( 批號 110809- 200604) 、咖啡酸 ( 批號 110885-200102) 、蒙花苷 ( 批號 111528-201710) 對照品均購自中國食品藥 品 檢 定 研 究 院; 異 綠 原 酸 A ( 批 號 MUST18032601) 、異綠原酸 B ( 批號 MUST-18031602) 、新綠原酸 ( 批號 MUST-18031001) 、隱綠原酸 ( 批 號 MUST-18032403) 、異 綠 原 酸 C ( 批 號 MUST18031603) 對照品均購自成都曼思特有限公司。 乙腈、甲醇為色譜純 ( 美國 Tedia 公司) ; 甲酸為 分析純 ( 長沙市匯虹化玻儀器設(shè)備有限公司) ; 水 為怡寶純凈水。復(fù)方感冒靈顆粒由華潤三九 ( 郴 州) 制藥有限公司提供，共 10 批，批號分別為 1709026N、1709027N、1709028N、1806254N、1806255N、 1806256N、 1806257、 1806258N、 1806259N、 1806260N， 編號 S1～ S10。

2 方法與結(jié)果

精密稱取各對照品適量， 50%甲醇定容，即得，每 1 mL 分別含對乙酰氨基 酚 2. 6 mg、原兒茶酸 10 μg、新綠原酸 80 μg、綠 原酸 100 μg、咖啡因 0. 18 mg、隱綠原酸 80 μg、 咖啡 酸 5 μg、異 綠 原 酸 B 40 μg、異 綠 原 酸 A 20 μg、異綠原酸 C 45 μg、蒙花苷 100 μg。精密稱取顆粒粉末 9. 0 g， 置于具塞錐形瓶中，精密加入 50 mL 50% 甲醇， 稱定 質(zhì) 量，超 聲 ( 功 率 250 W、頻 率 50 kHz) 30 min，冷卻，50%甲醇溶液補足減失的質(zhì)量，搖 勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。Kromasil C18 色譜柱 ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ; 流 動 相 乙 腈 ( A) -0. 1% 甲 酸 ( B) ，梯度洗脫 ( 0 ～ 20 min，5% →18% A; 20 ～ 45 min，18%→26%A; 45 ～ 55 min，26%→35%A; 55～ 60 min，35% →5% A; 60 ～ 65 min，5% A) ; 檢測 波 長 290 nm; 柱 溫 30 ℃ ; 體 積 流 量 1. 0 mL /min; 進樣量 10 μL。色譜圖見圖 1。

電噴霧電離源離子化 ( ESI) ，負 離子模式采集; 輔助噴霧電離、脫溶劑氣體高純 N2 ; 干燥氣體積流量 6. 8 L /min; 鞘氣溫度 350 ℃ ; 毛細管電壓 4. 0 kV; 碎片電壓 130 V; m /z 50 ～ 1 000。取供試品 ( S1) 溶液，于 0、 3、6、9、12、15、24 h 在 “2. 3” 項色譜條件下 進樣測定，測得各共有峰相對保留時間、相對峰面 積 ＲSD 均小于 3%，表 明 溶 液 在 24 h 內(nèi) 穩(wěn) 定 性 良好。

3 討論

考察了超 聲提取、回流提取，發(fā)現(xiàn)兩者對測定結(jié)果無明顯影 響，故選擇操作簡便的前者，再比較了提取溶劑 ( 甲醇、乙醇、50% 甲醇、50% 乙醇) 、溶劑用量 ( 25、 50、 100 mL ) 、 提 取 時 間 ( 20、 30、 40 min) ，綜合考慮色譜峰數(shù)、分離度、對稱因子、 相對內(nèi)參比峰面積和，最終確定供試品溶液制備方法為 50 mL 50%甲醇超聲提取 30 min。本實驗利用二極管陣列檢測 器全波長掃描，重點考察了 245、256、260、273、 290、325、330、334 nm 波長下的指紋圖譜，綜合 考慮色譜峰數(shù)、分離度、相對內(nèi)參比峰面積和，發(fā) 現(xiàn) 290 nm 處效果較好，故選擇其作為檢測波長。 由于復(fù)方感冒靈顆粒中野菊花、 山銀花等藥材所含成分呈略偏酸性，故流動相也應(yīng)略偏酸。文獻  報道，山銀花、野菊花中 主要成分的 HPLC 分離溶劑一般采用乙腈，而液質(zhì) 采用甲酸，故水相為 0. 1%甲酸。再選擇 5 種流動 相比例來優(yōu)化梯度洗脫條件，發(fā)現(xiàn)以 “2. 3”項下 流動相洗脫時基線較平穩(wěn)，色譜峰分離良好，而且 數(shù)量多，高度適中。



 

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