白芷為傘形科植物白芷 Angelica dahurica ( Fisch． ex Hoffm．) Benth． et Hook． f． 或 杭 白 芷 Angelica dahurica ( Fisch． ex Hoffm．) Benth． et Hook． f． var． formosana ( Boiss) Shan et Yuan 的干燥根，主要用于治療感冒頭痛、眉棱骨 痛、鼻塞、鼻淵、牙痛、白帶異常、瘡瘍腫痛，其主要 成分為香豆素、揮發(fā)油，其中有效鎮(zhèn)痛物質(zhì)是前者，并且 有一些具有抗氧化、抗增殖活性，如歐前胡素、異歐前 胡素等。本實(shí)驗(yàn)建立 HPLC 法測(cè)定歐前胡素含有量，并 在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化白芷中香豆素類(lèi)成 分滲漉提取工藝，以期為相關(guān)研究提供理論依據(jù)。

1 材料

1. 1 儀器

EC2000 高效液相色譜儀 ( 配置 UV230+ 紫外可見(jiàn)檢測(cè)器、手動(dòng)進(jìn)樣器，大連依利特分析儀器有限公 司) ; ＲE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ( 上海亞榮生化儀器廠) ; SHB- Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵 ( 鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司) ; DLSB-5120 低溫冷卻液循環(huán)泵 ( 上海賢德實(shí)驗(yàn)儀器有限公 司) ; KQ-300TDE 高頻數(shù)控超聲波清洗器 ( 昆山舒美超聲儀器有限公司) ; HX-200 高速中藥粉碎機(jī) ( 浙江省永康市溪 岸五金藥具廠) ; AＲ124CN 電子天 平 ［奧 豪 斯 儀 器 ( 上 海) 有限公司］。

1. 2 試藥

白芷 ( 批號(hào) G07816F01) 購(gòu)自四川中庸藥業(yè)有限公司，經(jīng)專(zhuān)家鑒定為正 品。歐前胡素對(duì)照品 ( 批 號(hào) T9MZ-FFSK，上海源葉生物科技有限公司) 。甲醇為色譜 純; 乙醇為分析純; 水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2. 1 粉碎度考察

取藥材適量，粉碎，稱(chēng)取粉碎度 10、 20、30、40 目的各 20 g，40 mL 80%乙醇濕潤(rùn)浸泡，裝筒，加入 8 倍量 80%乙醇，滲漉速度 3 mL/ ( min·kg) ，浸泡 時(shí)間 12 h，滲漉液置于 50 ℃水浴中濃縮定容至 50 mL 量瓶 中，再吸取 2. 0 mL 定容至 10 mL 量瓶中，搖勻，0. 45 μm 微孔濾膜過(guò)濾。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，粉碎度 20 目時(shí)歐前胡素含有量 最高，故選擇其進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2. 2 對(duì)照品溶液制備

精密稱(chēng)取歐前胡素對(duì) 照 品 10. 00 mg，置于 50 mL 量瓶中，甲醇溶解定容至刻度，搖 勻，精密吸取 3. 0、4. 0、5. 0、6. 0、7. 0 mL 于 10 mL 量瓶 中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，0. 45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，即 得 ( 每 1 mL 分別含 0. 06、0. 08、0. 10、0. 12、0. 14 mg 歐 前胡素) 。

2. 3 供試品溶液制備

將藥材粉碎成粗粉，過(guò) 20 目篩， 稱(chēng)取 20 g，40 mL 乙醇濕潤(rùn)浸泡，裝筒，續(xù)加乙醇，靜置， 滲漉，滲漉液置于 50 ℃ 水浴中，濃縮定容至 50 mL 量瓶 中，再吸取 2. 0 mL 定容至 10 mL 量瓶中，搖勻，0. 45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2. 4 色譜條件

Kromasil C18 色譜柱 ( 4. 6 mm × 150 mm， 5 μm) ; 流動(dòng)相甲醇 ∶ 水 ( 65 ∶ 35) ; 檢測(cè)波長(zhǎng) 300 nm; 柱 溫室溫; 體積流量 1. 0 mL/min; 進(jìn)樣量 20 μL。色譜圖見(jiàn) 圖 1，理論塔板數(shù)不低于 3 000。

2. 5 線性關(guān)系考察

吸取 “2. 2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，以溶 液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) ( X) ，峰面積為縱坐標(biāo) ( Y) 進(jìn)行回 歸，得方程為 Y = 21 596. 95X + 438. 653 ( Ｒ2 = 0. 999 67) ， 在 0. 06～ 0. 14 mg /mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2. 6 含有量測(cè)定

公式為含有量 = 12. 5× ( Y－438. 653) 21 596. 95 ， 其中 Y 為歐前胡素峰面積。

3 討論

白芷中香豆素類(lèi)成分歐前胡素和異歐前胡素受熱不穩(wěn) 定，前者易發(fā)生 Claisen 烯丙基重排，生成別歐前胡素，即 使在真空中加熱也會(huì)如此。前期曾采用水蒸氣蒸餾法提 取白芷，但得率低，耗時(shí)長(zhǎng)，浪費(fèi)能源，同時(shí)易破壞其他有效成分，故本實(shí)驗(yàn)采用乙醇滲漉法提取，能較好地保 留有效成分。 由于粉碎度過(guò)細(xì)時(shí)，提取率反而會(huì)下降，故白芷在 提取過(guò)程中不宜粉碎過(guò)細(xì)，避免提取過(guò)程中發(fā)生堵塞滲漉 筒現(xiàn)象，影響提取效果。同時(shí)，采用粗粉進(jìn)行提取，即方 便操作，也符合滲漉法提取特點(diǎn)和要求。 在含有量測(cè)定時(shí)，曾采用精密量取提取液，低溫蒸干 后甲醇溶解殘?jiān)姆椒▉?lái)制備供試品溶液，但在甲醇溶解、 轉(zhuǎn)移過(guò)程中會(huì)造成有效成分的損失。因此，采用提取液稀 釋后進(jìn)行測(cè)定，該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠。



 

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