茵梔黃顆粒收錄于 2015 年版《中華人民共和 國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱(chēng)《中國(guó)藥典》）第一部，由茵陳、梔 子、黃芩、金銀花 4 味藥材的提取物制成 。傳統(tǒng)中 藥理論認(rèn)為該方中茵陳為君藥，梔子、黃芩為臣藥，佐 以具有清熱解毒作用的金銀花，共同起到清熱解毒及 利濕退黃的功效 。

二元高壓雙泵 LC-20AT 高效液相色譜儀（島津公司）；SPD-M20A 光電二極管陣列紫外可見(jiàn)光檢測(cè) 器（島津公司）；KQ-500DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；ES 225SM-DR 型十萬(wàn)分之 一天平（SWISS MADE）；金怡旋渦混合器（金壇市醫(yī) 療儀器廠）；SZ-93 自動(dòng)雙重純水蒸餾器（上海雅榮生化儀器設(shè)備有限公司）。

化 學(xué) 對(duì) 照 品 新 綠 原 酸（批 號(hào) AF7050442）、京 尼 平 苷（批 號(hào) AF7110308）、1，3- 二咖啡酰奎寧酸 （批 號(hào) AF8030809）、3，4- 二 咖 啡 酰 奎 寧 酸（批 號(hào) AF7080124）、4，5- 二咖啡?？鼘幩幔ㄅ?hào)AF7060542）、 黃芩苷（批號(hào) AF7061702）、濱蒿內(nèi)酯（批號(hào) AF8030807）、 漢黃芩素（批號(hào) AF7121402）、黃芩素（批號(hào) AF8030808）、 漢 黃 芩 苷（批 號(hào) AB7100922）、千 層 紙 素 A（批 號(hào) AF7110209）均購(gòu)自成都埃法生物科技有限公司，綠 原 酸（批 號(hào) 110753-200413）購(gòu) 自 中 國(guó) 食 品 藥 品 檢 定研究院，3，5- 二咖啡?？鼘幩幔ㄅ?hào) 161022）購(gòu) 自成都昂賽思生物科技有限公司，木犀草苷（批號(hào) Y05D8H49919）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，其 純度均 >98.0%（HPLC 測(cè)定）。市售 1~8 號(hào)茵梔黃顆 粒樣品，批號(hào)分別為 09180011、08118030、08118020、 00918004、00917188、00917122、00917102、 00916101，魯南厚普制藥有限公司。甲酸為分析純， 天津市富宇精細(xì)化工有限公司；乙腈、甲醇為色譜純， Fisher 公司；水為超純水。

色 譜 柱：迪 馬 公 司 Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流 動(dòng) 相：乙 腈（A）-0.1% 甲酸水溶液 （B），梯 度 洗 脫（0~5 min，15%A → 20%A；5~20 min， 20%A → 35%A；20~40 min，35%A → 55%A；40~45 min， 55%A → 35%A）；流速：1.0 mL·min–1 ；檢測(cè)波長(zhǎng)：325 nm；柱溫：30 ℃ ；進(jìn)樣量：20 μL；運(yùn)行時(shí)間：45 min。

取茵梔黃顆粒適量，研細(xì)，取 0.20 g，精密稱(chēng)定，置 25 mL 具塞錐形瓶中，加 50% 甲醇水 約 20 mL，超聲提?。?00 W，40 kHz）30 min。提取液 取出放冷后用 50% 甲醇水定容至 25 mL，搖勻，過(guò)濾， 棄去初濾液，取續(xù)濾液過(guò) 0.22 μm 微孔濾膜，即得。 2.2.2 對(duì)照品溶液　精密稱(chēng)取新綠原酸、綠原酸、京 尼平苷、1，3- 二咖啡?？鼘幩帷⒛鞠蒈?、3，4- 二 咖啡酰奎寧酸、3，5- 二咖啡酰奎寧酸、4，5- 二咖啡 ?？鼘幩?、黃芩苷、濱蒿內(nèi)酯、漢黃芩素、黃芩素、漢黃芩苷、千層紙素 A 的對(duì)照品適量，分別用甲醇溶解， 制成質(zhì)量濃度均為 1.0 mg·mL-1 的 14 個(gè)對(duì)照品儲(chǔ)備 液。分別取 14 個(gè)對(duì)照品儲(chǔ)備液各 0.1 mL，置同一 5 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻，即得混合對(duì)照 品溶液。依次精密吸取新綠原酸、綠原酸、漢黃芩素 的對(duì)照品儲(chǔ)備液各 1 mL，1，3- 二咖啡?？鼘幩?、木 犀草苷、黃芩素的對(duì)照品儲(chǔ)備液各 0.5 mL，3，4- 二 咖啡酰奎寧酸、3，5- 二咖啡?？鼘幩?、4，5- 二咖啡 ?？鼘幩岬膶?duì)照品儲(chǔ)備液各 1 mL，濱蒿內(nèi)酯、漢黃芩 苷、千層紙素 A 的對(duì)照品儲(chǔ)備液各 1 mL，分別置于 4 個(gè) 10 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻，即得混合 對(duì)照品溶液 A、B、C、D。將上述對(duì)照品儲(chǔ)備液、混合 對(duì)照品溶液于 4 ℃保存，備用。

取混合對(duì)照品溶液和供試 品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，發(fā)現(xiàn)混合對(duì)照 品及供試品中各化合物的色譜峰基本達(dá)到基線分離， 并且分離度良好，見(jiàn)圖 1。

2.3.2 線性關(guān)系考察　

精密吸取黃芩苷對(duì)照品儲(chǔ)備 液 0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL，分別用甲醇稀釋并 定容至 1.0 mL，即得系列黃芩苷對(duì)照品溶液；精密 吸取京尼平苷對(duì)照品儲(chǔ)備液 0.04、0.06、0.08、0.10、 0.12、0.14 mL，分別用甲醇稀釋并定容至 1.0 mL，即 得系列京尼平苷對(duì)照品溶液；精密吸取混合對(duì)照品 溶液 A 0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，混合對(duì)照品溶 液 B 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 mL，混合對(duì)照品溶液C 0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，混 合 對(duì) 照 品 溶 液 D 0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mL，分別用甲醇稀釋并 定容至 10.0 mL，即得系列混合對(duì)照品溶液。在“2.1” 項(xiàng)色譜條件下，取上述各濃度系列對(duì)照品溶液分別進(jìn) 樣 20 μL 進(jìn)行分析，以峰面積積分值 Y 對(duì)進(jìn)樣濃度 X （μg·mL-1）進(jìn)行回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算 14 個(gè)成分 的回歸方程及線性范圍。

在流動(dòng)相的選擇上，比較了甲醇 - 水、甲醇 - 0.1% 甲酸水、乙腈 -0.1% 甲酸水溶液，以各色譜峰 分離度、出峰時(shí)間、峰形為評(píng)價(jià)指標(biāo)。以甲醇 - 水系 為流動(dòng)相梯度洗脫時(shí)，柱壓較高，峰形較差；以乙腈 - 0.1% 甲酸水溶液梯度洗脫時(shí)，柱壓較低，各色譜峰分 離良好且基線平穩(wěn)，故選定乙腈 -0.1% 甲酸水溶液 作為梯度洗脫流動(dòng)相。

根據(jù)《中國(guó)藥典》2015 年版及各成分的出峰時(shí) 間，比較了供試品溶液在波長(zhǎng) 238、280、325 nm 時(shí)的 色譜圖數(shù)據(jù)，結(jié)果表明在 325 nm 波長(zhǎng)下，新綠原酸、 綠原酸、1，3- 二咖啡?？鼘幩帷⒛鞠蒈?、3，4- 二 咖啡?？鼘幩帷?，5- 二咖啡?？鼘幩帷?，5- 二咖啡 酰奎寧酸、黃芩苷、濱蒿內(nèi)酯、漢黃芩素、黃芩素、漢黃 芩苷、千層紙素 A 均有較強(qiáng)的吸收，京尼平苷雖吸收 較弱，但是在此波長(zhǎng)下仍可以進(jìn)行有效檢測(cè)，且該波 長(zhǎng)下基線平穩(wěn)，出峰數(shù)較多，色譜峰響應(yīng)值較高，故最終選擇 325 nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)。

本實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定茵梔黃 顆粒中 14 個(gè)有效成分的含量，且該方法操作簡(jiǎn)單，測(cè) 定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，并具有較好的重復(fù)性、穩(wěn)定性，可實(shí) 際應(yīng)用于對(duì)茵梔黃顆粒的含量測(cè)定，為完善茵梔黃顆 粒質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)為后續(xù)研究茵 梔黃顆粒中有效活性成分提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。