一測多評(píng)（quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMS）是一種適合中藥特點(diǎn)的多指 標(biāo)質(zhì)量評(píng)價(jià)的新模式，它利用樣品中化學(xué)成分的比例 關(guān)系，在只測定 1 個(gè)成分（內(nèi)參物，通常為典型成分 且化學(xué)對(duì)照品可得到者）的情況下，實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)成分 （對(duì)照品難以得到或難供應(yīng)）含量的測定。該方法克 服了對(duì)照品短缺這一問題，即只測定某個(gè)代表性成 分，同時(shí)可計(jì)算出其他待測有效成分的含量 。一 測多評(píng)法是經(jīng)嚴(yán)格的方法學(xué)考察，建立內(nèi)參物與其 他成分間的相對(duì)校正因子，并用其計(jì)算其他成分的 含量。近年來，一測多評(píng)法已得到廣泛的認(rèn)可和驗(yàn) 證，并成功應(yīng)用于多種藥材的多成分含量測定研究 中 ，黃連藥材的一測多評(píng)法被《中華人民共和國 藥典》（以下簡稱《中國藥典》）采用。

Agilent 1260 液相系統(tǒng)：配有 G1311C 四元梯度 泵，G1329B 自 動(dòng) 進(jìn) 樣 器，G1316A 柱 溫 箱，G4212B DAD 檢測器（Agilent Technologies 公司）；Mettler XP205 電子天平（梅特勒公司）；KQ-800KDE 型超聲儀 （昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q 超純水處理系 統(tǒng)（Millipore 公司）。

乙 腈（色 譜 純，F(xiàn)isher 公 司，批 號(hào) 165747）；磷 酸（色譜純，F(xiàn)isher 公司，批號(hào) 154772）；甲醇（分析 純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào) 20161025）；實(shí) 驗(yàn)用水為超純水。對(duì)照品金絲桃苷（批號(hào) 111521- 201708，純度 95.1%）、槲皮素（批號(hào) 100081-200907， 純 度 96.5%）、山 柰 酚（批 號(hào) 110861-200808，純 度 95.9%）購自中國食品藥品檢定研究院，蘆?。ㄅ?hào) 16111111，純度 98.0%）、紫云英苷（批號(hào) 17031820， 純度 98.8%）購自上海雅吉生物科技有限公司，異槲 皮苷（批號(hào) CFS201701，純度 98.8%）購自武漢天植 生物技術(shù)有限公司。 20 批羅布麻葉藥材購自全國 11 個(gè)省、市、自治 區(qū)的藥店或藥材市場，經(jīng)北京醫(yī)院藥學(xué)部徐碩主管 藥師鑒定為夾竹桃科羅布麻屬植物羅布麻 Apocynum venetum L. 的干燥葉。

色 譜 柱：Waters XBridge C18 色 譜 柱（250 mm× 4.6 mm，5 µm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.2% 磷酸溶液 （B），梯 度 洗 脫（0~8 min，5%A → 12%A；8~20 min， 12%A → 18%A；20~35 min，18%A → 25%A；35~40 min，25%A → 35%A；40~50 min，35%A → 50%A）； 流速：0.8 mL·min-1；檢測波長：256 nm；柱溫：35 ℃； 進(jìn)樣量：10 µL。

分別精密稱取蘆丁、金絲桃 苷、異槲皮苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚的對(duì)照品適 量，用 80% 甲醇水溶液溶解，配制成質(zhì)量濃度分別為20.8、568、460、204、40.6、13.6 μg·mL-1 的混合對(duì)照 品儲(chǔ)備液。精密量取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液 1、2.5、4、5、 6、12.5、25 mL，分別置于 50 mL 量瓶中，加 80% 甲醇 水溶液稀釋至刻度，搖勻，獲得 7 個(gè)系列濃度混合對(duì) 照品溶液（蘆丁：0.416，1.04，1.664，2.08，2.496，5.2， 10.4 μg·mL-1；金 絲 桃 苷：11.36，28.4，45.44，56.8， 68.16，142，284 μg·mL-1；異 槲 皮 苷：9.2，23，36.8， 46，55.2，115，230 μg·mL-1；紫 云 英 苷：4.08，10.2， 16.32，20.4，24.48，51，102 μg·mL-1；槲皮素：0.812， 2.03，3.248，4.06，4.872，10.15，20.3 μg·mL-1；山柰酚： 0.272，0.68，1.088，1.36，1.632，3.4，6.8 μg·mL-1）。

取羅布麻藥材粉末（過 60 目 篩）約 0.5 g，精密稱定，置于 25 mL 量瓶中，加入 80% 甲醇水溶液 15 mL，振蕩 2 min，超聲提取（功率 800 W，頻率 40 kHz）60 min，冷卻至室溫后，加 80% 甲醇 水溶液稀釋至刻度，搖勻，經(jīng) 0.22 µm 微孔濾膜濾過， 取續(xù)濾液即得。

在“2.1”項(xiàng)的色譜條件下， 6 個(gè)待測成分的理論塔板數(shù)均大于 90 000，樣品中 6 個(gè)待測成分色譜峰峰形良好，與相鄰峰的分離度大于 1.5?；旌蠈?duì)照品及羅布麻葉樣品色譜圖見圖 1。

3　討論

3.1 檢測波長的選擇

根據(jù)各成分在流動(dòng)相中的紫外吸收譜圖來確定 檢測波長。蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素均在 256 nm 處有最大吸收，紫云英苷、山柰酚在 266 nm 處有最大吸收，在 256 nm 處也均有較強(qiáng)吸收，兼顧 6 個(gè)成分在樣品色譜圖中的響應(yīng)值，最終選擇 256 nm 作為檢測波長。

金絲桃苷是《中國藥典》2015 年版規(guī)定的羅布 麻葉質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分，而且其在供試品溶液中 含量較高，性質(zhì)穩(wěn)定，較易獲得，故選擇為內(nèi)參物，建 立與其他待測成分間的相對(duì)校正因子。

本研究考察了采用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷 酸、乙腈 -0.2% 磷酸、乙腈 -0.5% 磷酸溶液作為流動(dòng)相 對(duì) 6 個(gè)待測成分含量測定結(jié)果的影響，結(jié)果顯示用乙 腈 -0.2% 和 0.5% 磷酸時(shí)的效果較好且基本一致，故 選擇乙腈 -0.2% 磷酸溶液為流動(dòng)相。通過反復(fù)摸索， 考察不同梯度洗脫程序，在最終確定的色譜條件下， 6 個(gè)待測成分峰形良好，理論塔板數(shù)均大于 90 000，待 測成分間以及與樣品中其他成分之間的分離度良好。