紫花杜鵑為杜鵑花科植物紫花杜鵑（Rhododendron mariae Hance）的干燥葉或帶葉嫩枝，味微辛、性微 溫，廣泛分布于廣東省嶺南、羅定、高要，云南麗江以 及四川寶興等地區(qū)。紫花杜鵑包含揮發(fā)油、黃酮、有 機(jī)酸、萜類、酚類、鞣質(zhì)等活性成分 ，其中黃酮類成 分藥用效果顯著。研究表明，紫花杜鵑的黃酮類 物質(zhì)具有祛痰止咳、殺菌消炎、鎮(zhèn)痛的效果，故在 單方和中藥復(fù)方制劑中都有廣泛的應(yīng)用。目前以紫 花杜鵑入藥的中成藥很多，如紫花杜鵑片、紫花杜鵑 膠囊、祛痰止咳顆粒、祛痰止咳膠囊等，臨床上對(duì)慢性 支氣管炎有顯著的治療效果。

1　儀器與試藥

1.1 儀器　

Agilent 1220 高效液相色譜儀（安捷倫公 司）；BS 124S 十萬分之一電子天平（Sartourius 公司）； 昆山舒美KQ-250B 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥　

對(duì)照品槲皮素（批號(hào) 100081-200406）、 槲皮苷（批號(hào) 111538-200302）、金絲桃苷（批號(hào) 111521- 200305）、蕓香苷（批號(hào) 100080-200306）均購自中國 食品藥品檢定研究院；水為娃哈哈純凈水；其他試劑 均為分析純。實(shí)驗(yàn)所用紫花杜鵑藥材（編號(hào) 1~15） 于 2017 年 4 月至 6 月采自不同產(chǎn)地，由吉林省中醫(yī) 藥科學(xué)院趙全成教授鑒定均為正品。

2　方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為 ACE C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相 A 相為 0.2% 磷酸水，B 相為乙 腈溶液，梯度洗脫（0~15 min，90%A；15~25 min， 90%A → 85%A；25~35 min，85%A → 80%A；35~50 min，80%A → 70%A；50~60 min，70%A → 65%A； 60~70 min，65%A → 60%A）；流速為 1.0 mL·min-1 ； 檢測(cè)波長為 254 nm；柱溫為 30 ℃；進(jìn)樣量為 10 μL。 色譜圖見圖 1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備　

精密稱取對(duì)照品蕓香苷 10.10 mg、金絲桃苷 10.80 mg、槲皮苷 10.05 mg 和槲 皮素 5.15 mg，分別置 50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并定 容至刻度，得單一對(duì)照品儲(chǔ)備液；分別精密量取蕓香 苷對(duì)照品儲(chǔ)備液 0.5 mL，金絲桃苷對(duì)照品儲(chǔ)備液 1.0 mL，槲皮苷對(duì)照品儲(chǔ)備液 3.0 mL，槲皮素對(duì)照品儲(chǔ)備 液 0.4 mL，置同一 10 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度， 制得每 1 mL 含蕓香苷 0.010 1 mg、金絲桃苷 0.021 6 mg、槲皮苷 0.0603mg 和槲皮素 0.0041mg 的混合對(duì) 照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備　

取樣品（過 40 目篩）0.5 g，精密稱定，置 50 mL 量瓶中，加入甲醇約 40 mL，超 聲（功率 250W，頻率 40 kHz）提取 30 min，放至室 溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.4 線性關(guān)系考察　

分別精密量取混合對(duì)照品溶液 2、4、8、12、16、20µL 進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn) 樣量 X（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。 蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的回歸方程分別為 Y=2.638×103 X-1.73 r=0.999 6 Y=3.209×103 X-3.54 r=0.999 9 Y=2.100×103 X+11.43 r=0.999 5 Y=4.079×103 X-3.77 r=0.999 0線性范圍分別為0.0202~0.202μg、0.0432~0.432μg、 0.120 6~1.206 μg、0.008 2~0.082 μg，各成分進(jìn)樣量與 峰面積呈線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)　

取供試品溶液（2 號(hào)樣）10 µL，連 續(xù)進(jìn)樣 6 次，記錄峰面積并計(jì)算，蕓香苷、金絲桃苷、 槲皮苷、槲皮素峰面積的 RSD 分別為 0.95%、0.54%、 0.72%、1.0%，表明儀器的精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取供試樣品（2 號(hào)樣）6 份，按 照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按色譜條件規(guī)定進(jìn)樣 測(cè)定其峰面積，計(jì)算蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷及槲皮素 的含量分別為 0.147%、0.265%、0.894%、0.020%，RSD 分 別為 0.93%、0.57%、0.69%、1.0%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)　

取供試品（2 號(hào)樣），按照“2.3”項(xiàng) 下方法制備供試品溶液，分別于 2、4、8、16、24、48 h 進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算蕓香苷、金絲桃苷、槲皮 苷及槲皮素的含量，結(jié)果蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、 槲皮素含量的 RSD 分別為 0.91%、0.56%、0.69%、 1.0%，表明供試品溶液在 48 h 內(nèi)穩(wěn)定。

3　討論

3.1　分析方法確定　

由于紫花杜鵑中成分具有多 樣 性，單 一 濃 度 甲 醇 - 水、乙 腈 - 水 不 能 將 有 效 成 分峰理想分離，所以經(jīng)過多次試驗(yàn)擇優(yōu)，本實(shí)驗(yàn)以乙 腈 -0.2% 磷酸水溶液為流動(dòng)相，采用梯度洗脫，樣品 中蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素達(dá)到基線分離； 采用 254 nm 為檢測(cè)波長，使樣品中的目標(biāo)峰和雜質(zhì) 峰完全分離；由于蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素 為黃酮類的低極性化合物，故選用不同濃度乙醇和甲 醇對(duì)提取溶劑進(jìn)行考察，結(jié)果表明甲醇提取效果更 好；同時(shí)采用超聲和回流 2 種提取方法對(duì)提取方法 進(jìn)行了考察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩者提取效率接近，無明 顯差別，考慮到超聲提取操作簡單，故此選擇超聲提 取；提取時(shí)間考察結(jié)果表明，在 30 min 內(nèi)目標(biāo)化合物 已充分溶解。

3.2 結(jié)果分析　

本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同產(chǎn)地和不同采收期的 紫花杜鵑干燥葉及嫩枝中的蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素進(jìn)行含量測(cè)定，通過實(shí)驗(yàn)看出，不同產(chǎn)地 的蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素含量明顯不同， 同一采收期藥材廣東羅定的含量最高，云南麗江的 含量最低，5 月份槲皮苷變化最為明顯。不同采收 期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，廣東 3 個(gè)地區(qū)的 5 月份采收的紫 花杜鵑中 4 個(gè)成分的含量最高，云南麗江及四川寶 興 6 月份采收的紫花杜鵑中 4 個(gè)成分的含量最高， 推測(cè)可能由于地區(qū)間的差異，使開花期延后所致，說 明紫花杜鵑在花開始開放還未完全開放時(shí)有效成分 的含量最高，可以為紫花杜鵑的采收期的確定奠定 基礎(chǔ)。 本研究采用建立的含量測(cè)定方法對(duì)含紫花杜鵑 藥材的中成藥進(jìn)行 4 個(gè)黃酮成分的含量測(cè)定研究，實(shí) 驗(yàn)結(jié)果表明，本方法適合于含紫花杜鵑藥材的中成 藥的含量測(cè)定，其分離度、耐用性等均符合規(guī)定。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以為紫花杜鵑藥材的質(zhì)量控制研究奠定 基礎(chǔ)。