丹參為唇形科植物丹參 Salvia miltiorrhize Bge. 的干燥根和根莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具 有活血祛瘀、通經(jīng)止痛和清心除煩的功效。丹參 的有效成分有水溶性和脂溶性 2 大類(lèi)，本實(shí)驗(yàn)中的 丹參水提取物為水溶性成分，以丹酚酸 B （salvianolic acid B）和紫草酸（lithospermic acid） 等酚酸類(lèi)物質(zhì)為主要成分。目前，丹參水提取物中 的含量較高的主要成分研究已經(jīng)很多，本實(shí)驗(yàn)基 于四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)（Q-TOF-MS）進(jìn)一步 分析了丹參水提取物中的化學(xué)成分；并對(duì)部分用 常規(guī)手段難以檢測(cè)的低含量成分，基于四極桿-線性 離子阱質(zhì)譜（Q-Trap-MS）技術(shù)與方法進(jìn)行了 半定量研究。半定量的方法目前研究尚少，但 對(duì)沒(méi)有對(duì)照品的物質(zhì)來(lái)說(shuō)卻極為重要。

AcquityTM UPLC 超高效液相色譜系統(tǒng)、Synapt G2 Q-TOF-MS 質(zhì)譜系統(tǒng)、MassLynx V4.1 質(zhì)譜工作 站、Acquity UPLC HSS T3 色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），美國(guó) Waters 公司；AB SCIEX Q-Trap 5500液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，島津UFLC超高效液相系統(tǒng)（配 備 DGU-20A5R 脫氣機(jī)，SIL-30AC 自動(dòng)進(jìn)樣器， CTO-30A 柱溫箱，LC-30AD 液相泵）；KQ-500DE 型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；XS105 型十萬(wàn)分之一天平，梅特勒-托利多儀器有限 公司。水為超純水，Milli-Q 型超純水系統(tǒng)，德國(guó) Millipore 公司；甲醇、乙腈，質(zhì)譜純，德國(guó) Merck 公司；甲酸，質(zhì)譜純，美國(guó) Sigma 公司；其余試劑 均為分析純。 對(duì)照品丹酚酸 B（批號(hào) 111562-201716，質(zhì)量分 數(shù) 94.1%），購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；紫草酸 （批號(hào) FY18351203，質(zhì)量分?jǐn)?shù) 96.3%），購(gòu)自南京飛 宇生物科技有限公司。5 批丹參水提取物批號(hào)分別 為 20100201、20110503、20111205、20111206、 2014A02，均由天津天士力之驕藥業(yè)有限公司提供， 該提取物由水煮沸提取而得。

稱(chēng)取丹酚酸 B 對(duì)照品 0.91 mg 和紫草酸對(duì)照品 0.99 mg，分置 100 mL 量瓶中，加純水溶解，定容 至刻度。再分別稀釋 2、10、50、100、200、500 和 1 000 倍，備用。

稱(chēng)取 5 批丹參水提取物各約 1 mg，分置 2 mL 量瓶中，加純水溶解，定容至刻度，備用。

色譜柱為 Waters Acquity UPLC HSS T3 柱（100 mm×2.1 mm， 1.8 μm），柱溫 30 ℃，樣品室溫度 4 ℃。流動(dòng)相為 乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫，0～3 min，10%～ 19%乙腈；3～10 min，19%～23%乙腈；10～12 min， 23%～30%乙腈；12～14 min，30%～50%乙腈；14～ 20 min，50%～90%乙腈；20～21 min，90%～10% 乙腈；21～22 min，10%乙腈；進(jìn)樣量 5 μL，體積 流量 0.3 mL/min。

色譜柱為 Waters Acquity UPLC HSS T3 柱（100 mm×2.1 mm， 1.8 μm），柱溫 40 ℃。流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水溶 液，梯度洗脫：0.5～12 min，10%～35%乙腈；12～ 15 min，35%～70%乙腈；15～17 min，70%～100% 乙腈；17～18.4 min，100%乙腈；18.4～19 min， 100%～10%乙腈；進(jìn)樣量 3 μL，體積流量 0.3 mL/min。另外，在檢測(cè)未知成分時(shí)，將色譜柱流出 液在 0～6 min 進(jìn)廢液，6～8.4 min 進(jìn)質(zhì)譜，8.4～10.6 min 進(jìn)廢液，10.6～15 min 進(jìn)質(zhì)譜，15～19 min 進(jìn) 廢液。檢測(cè)紫草酸和丹酚酸 B 對(duì)照品時(shí)，0～19 min 進(jìn)質(zhì)譜。

采用電噴 霧離子源（ESI），負(fù)離子模式，毛細(xì)管電壓 2.5 kV， 錐孔電壓 40 V，提取錐孔電壓 5 V，離子源溫度 110 ℃，脫溶劑氣體（N2）溫度為 350 ℃，脫溶劑氣體 流量 800 L/h，錐孔氣流量 50 L/h，采集頻率 0.2 s。 用亮氨酸腦啡肽作為內(nèi)標(biāo)（Lock SprayTM）進(jìn)行質(zhì) 量實(shí)時(shí)校正，體積流量為 5 μL/min。同樣質(zhì)譜條件 下的 3 種質(zhì)譜檢測(cè)模式分別為（1）MSE Continuum 掃描模式檢測(cè)，掃描時(shí)碰撞能量為 20～30 eV，質(zhì) 量掃描范圍 m/z 100～1 500。（2）MS/MS 模式下檢 測(cè)，碰撞室 Trap CE Control 使用線性能量掃描 20～ 30 eV，且碰撞室 Transfer CE Control 關(guān)閉。

離子源為 電噴霧離子源（負(fù)離子模式）；離子噴射電壓：−4 500 V；溫度：450 ℃；源內(nèi)氣體 1（GS1，N2）壓力：310 kPa；源內(nèi)氣體 2（GS2，N2）壓力：310 kPa； 氣簾氣體（N2）壓力：138 kPa；應(yīng)用 MRM 模式進(jìn) 行半定量分析，待測(cè)物質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表 1，表中參數(shù) 的選擇依據(jù)按照“2.6.1”項(xiàng)和“2.6.2”項(xiàng)下說(shuō)明。 

丹參水提取物中多為水溶性成分，且絕大部分 為酚酸類(lèi)物質(zhì)，在選用色譜柱的時(shí)候，因考慮到樣 品的特殊性，并參考其他的文獻(xiàn)，最后選用 Acquity UPLC HSS T3 柱，展現(xiàn)了良好的分離效果。另外，因大部分成分含有羧基，易脫 1 個(gè)氫離子，形成 [M－ H]− ，所以在用 Q-TOF-MS 進(jìn)行分析的時(shí)候，選用 負(fù)離子模式。

在對(duì)丹參水提取物中的成分進(jìn)行定性研究時(shí)， 并未使用對(duì)照品，而是通過(guò)查閱文獻(xiàn)和數(shù)據(jù)庫(kù)的方 式進(jìn)行定性。先建立已報(bào)導(dǎo)的丹參的質(zhì)譜譜庫(kù)（包 含母離子、子離子和保留時(shí)間），再比對(duì)質(zhì)譜圖中各成分的碎片離子和保留時(shí)間，從而確定物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。 一定程度上節(jié)省了資源，也加快了定性分析的時(shí)間， 更加方便后期對(duì)丹參更深入的研究。

丹參水提取物中包括同分異構(gòu)體共 11 種未知 成分的含量較低而丹酚酸B 和紫草酸等成分含量特 別高，使檢測(cè)器達(dá)到飽和，遂使保留時(shí)間在 8.4～ 10.6 min 的成分（丹酚酸 B、紫草酸等）經(jīng)色譜后直接進(jìn)入廢液，而不進(jìn)入質(zhì)譜檢測(cè)器。這樣，提高 11 種待測(cè)物質(zhì)量濃度的同時(shí)，也不會(huì)有過(guò)多的酚酸 類(lèi)的物質(zhì)進(jìn)入質(zhì)譜，產(chǎn)生殘留或影響檢測(cè)器靈敏度。



 

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