隨著人民生活水平提高和社會(huì)節(jié)奏加快，心腦 血管疾病已成為危害人類的第一殺手，其中心絞痛 是由冠狀動(dòng)脈供血不足、心肌急劇暫時(shí)缺血缺氧所 引起的，以發(fā)作性胸痛或胸部不適為主要表現(xiàn)的臨 床綜合征。復(fù)方黨參片源于國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)，是由黨參、丹參、北沙參、當(dāng)歸、金 果欖加工而成的中成藥復(fù)方制劑，具有活血化瘀、 益氣寧心功效，主要用于心肌缺血所致心絞痛、胸悶等病癥的治療，嚴(yán)善福等發(fā)現(xiàn)它對(duì)冠心病心 絞痛的臨床療效顯著，在改善氣虛血瘀情況方面優(yōu) 于復(fù)方丹參片，但現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及前期報(bào)道僅對(duì)該制劑中丹參所含的丹酚酸 B、丹參酮ⅡA 進(jìn) 行定量研究。

中成藥復(fù)方制劑成分復(fù)雜，其療效往往是多種 成分共同作用的結(jié)果，單一組分難以全面評(píng)價(jià)其內(nèi) 在質(zhì)量，而多組分評(píng)價(jià)模式已成為發(fā)展趨勢。因 此，本實(shí)驗(yàn)建立 HPLC 法同時(shí)測定復(fù)方黨參片中君藥黨參特征成分黨參炔苷，臣藥丹參代表性成分丹 參素、丹酚酸 B、丹參酮ⅡA，臣藥當(dāng)歸和佐藥北 沙參主要成分補(bǔ)骨脂素、花椒毒素、佛手苷內(nèi)酯、 歐前胡素、藁本內(nèi)酯的含有量，為該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 提高和完善提供數(shù)據(jù)支持。

Agilent 1100 型高效液相色譜儀 ( 美國 Agilent 公司) ; AE240 型分析天平 ( 十萬分之一，瑞士 Mettler-Toledo 公司) ; KQ-400DB 型數(shù)控超聲波清 洗器 ( 昆山市超聲儀器有限公司) 。復(fù)方黨參片 3 批 ( 片芯 0. 32 g，批號(hào) 170501、171101、180401) 購于桂林紅會(huì)藥業(yè)有限公司。補(bǔ)骨脂素 ( 110739- 201617，含 有 量 99. 7%) 、 丹 酚 酸 B ( 111562- 201716，含 有 量 94. 1%) 、 歐 前 胡 素 ( 110826- 201616，含有量 99. 6%) 對(duì)照品均購于中國食品 藥品檢定研究院; 黨參炔苷 ( 136085-37-5，含有 量 95. 0%) 、 丹 參 素 ( 22681-72-7， 含 有 量 98. 0%) 、丹參酮ⅡA ( 568-72-9，含有量 98. 0%) 、 花椒毒素 ( 298-81-7，含有量 98. 0%) 、佛手苷內(nèi) 酯 ( 484-20-8， 含 有 量 98. 0%) 、 藁 本 內(nèi) 酯 ( 81944-09-4，含有量 98. 0%) 對(duì)照品均購于上海 純優(yōu)生物科技有限公司。乙腈為色譜純; 其他試劑 均為分析純。

Hypersil C18色譜柱( 250 mm×4. 6 mm， 5 μm) ; 流動(dòng)相乙腈-0. 1% 甲酸，梯度洗脫 ( 0 ～ 14. 5 min，24. 0% A; 14. 5 ～ 19. 0 min，24. 0% → 30. 0% A; 19. 0 ～ 32. 5 min，30. 0% → 48. 0% A; 32. 5～52. 0 min，48. 0%→72. 0%A; 52. 0～60. 0 min， 72. 0%→24. 0%A) ; 0～19. 0 min 時(shí)在 269 nm 波長 下檢測黨參炔苷，19. 0 ～ 32. 5 min 時(shí)在 280 nm 波長下 檢 測 丹 參 素、丹 酚 酸 B、丹 參 酮 ⅡA ， 32. 5～46. 5 min 時(shí)在 310 nm 波長下檢測補(bǔ)骨脂素、 花椒 毒 素、佛 手 苷 內(nèi) 酯、歐 前 胡 素，46. 5 ～ 60. 0 min 時(shí)在 323 nm 波長下檢測藁本內(nèi)酯; 體 積流量 0. 9 mL /min; 柱溫 30 ℃ ; 進(jìn)樣量 10 μL。

精密稱取各對(duì)照品適量，75% 甲醇分別制成含黨參炔苷 4. 992 mg /mL、丹參素 0. 936 mg /mL、丹酚酸 B 9. 894 mg /mL、丹參酮ⅡA 1. 482 mg /mL、補(bǔ)骨脂素 0. 518 mg /mL、花椒毒素 1. 104 mg /mL、佛手苷內(nèi)酯 0. 392 mg /mL、歐前胡 素 0. 276 mg /mL、藁本內(nèi)酯 6. 212 mg /mL 的貯備 液，各精密吸取 2. 5 mL 置于 50 mL 量瓶中，75% 甲醇 定 容，即 得 ( 質(zhì) 量 濃 度 分 別 為 0. 249 6、0. 046 8、0. 494 7、0. 074 1、0. 025 9、0. 055 2、 0. 019 6、0. 013 8、0. 310 6 mg /mL) 。

取片劑適量，除去糖衣后研成 細(xì)粉，混勻，精密稱取約 2. 0 g，置于 25 mL 具塞 錐 形 瓶 中，精 密 加 入 75% 甲 醇 20 mL，超 聲 ( 400 W、40 kHz) 提取 30 min，放冷，75% 甲醇 定容至刻度，搖勻，濾過，即得。

按照片劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下的處 方和制法，分別制備缺黨參、丹參、北沙參、當(dāng)歸 的陰性樣品，按 “2. 3”項(xiàng)下方法制備，即得。

精密吸取對(duì)照品、供試品、 陰性樣品溶液適量，在 “2. 1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣 測定，各成分色譜峰峰形 對(duì)稱，與相鄰峰分離度均大于 1. 5，理論塔板數(shù)按 各成分計(jì)均大于 3 500。

精密吸取 “2. 2”項(xiàng)下貯 備液適量，75%甲醇稀釋 20 倍，在 “2. 1”項(xiàng)色譜 條件下進(jìn)樣測定。以溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) ( X) ， 峰面積為縱坐標(biāo) ( Y) 進(jìn)行回歸，結(jié)果見表 1，可 知各成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

，

2. 6. 2 精密度試驗(yàn)

精密吸取 “2. 2”項(xiàng)下對(duì)照 品溶液，在 “2. 1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定 6 次， 測得黨參炔苷、丹參素、丹酚酸 B、丹參酮ⅡA、 補(bǔ)骨脂素、花椒毒素、佛手苷內(nèi)酯、歐前胡素、藁 本內(nèi)酯峰面積 ＲSD 分別為 0. 71%、1. 10%、0. 56%、 0. 72%、1. 04%、0. 95%、1. 12%、1. 25%、0. 62%， 表明儀器精密度良好。

取同一批片劑6份，按 “2. 3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在 “2. 1”項(xiàng)色 譜條件下進(jìn)樣測定，測得黨參炔苷、丹參素、丹酚 酸 B、丹參酮ⅡA、補(bǔ)骨脂素、花椒毒素、佛手苷 內(nèi)酯、歐 前 胡 素、藁 本 內(nèi) 酯 含 有 量 ＲSD 分 別 為1. 63%、1. 70%、0. 47%、1. 69%、0. 54%、1. 71%、 1. 80%、0. 85%、1. 55%，表明該方法重復(fù)性良好。

取同一份供試品溶液，于 0、 2、4、8、12、24 h 在 “2. 1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，測得黨參炔苷、丹參素、丹酚酸 B、丹參酮 ⅡA、補(bǔ)骨脂素、花椒毒素、佛手苷內(nèi)酯、歐前胡 素、藁本內(nèi)酯峰面積 ＲSD 分別為 0. 65%、1. 09%、 0. 60%、0. 76%、1. 07%、1. 01%、1. 15%、1. 20%、 0. 66%，表明溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

取含有量已知的片劑6份，除去糖衣后研成細(xì)粉，混勻，精密稱取約 1. 0 g，置 于 25 mL 具 塞 錐 形 瓶 中，精 密 加 入 0. 931 mg /mL 黨參炔苷對(duì)照品溶液 4. 0 mL、 0. 541 mg /mL 丹參素對(duì)照品溶液 1. 0 mL、 1. 431 mg /mL 丹 酚 酸 B 對(duì) 照 品 溶 液 5. 0 mL、 0. 962 mg /mL 丹 參 酮 ⅡA 對(duì) 照 品 溶 液 1. 0 mL、 0. 329 mg /mL 補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液 1. 0 mL、 0. 648 mg /mL 花椒毒素對(duì)照品溶液 1. 0 mL、 0. 216 mg /mL 佛手苷內(nèi)酯對(duì)照品溶液 1. 0 mL、 0. 155 mg /mL 歐前胡素對(duì)照品溶液 1. 0 mL、 0. 877 mg /mL藁 本 內(nèi) 酯 對(duì) 照 品 溶 液 5. 0 mL，按 “2. 3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在 “2. 1”項(xiàng)色 譜條件下進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果，黨參炔 苷、丹參素、丹酚酸 B、丹參酮ⅡA、補(bǔ)骨脂素、 花椒毒素、佛手苷內(nèi)酯、歐前胡素、藁本內(nèi)酯平均 加樣 回 收 率 ( ＲSD) 分 別 為 98. 33% ( 1. 12%) 、 97. 70% ( 0. 95%) 、100. 23% ( 0. 78%) 、99. 45% ( 1. 40%) 、98. 49% ( 1. 32%) 、98. 79% ( 0. 84%) 、 97. 86% ( 1. 26%) 、 96. 97% ( 1. 59%) 、 99. 12% ( 0. 87%) 。 2. 7 樣品含有量測定 取 3 批片劑，按 “2. 3” 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在 “2. 1”項(xiàng)色譜條件 下進(jìn)樣測定，計(jì)算含有量，結(jié)果見表 2。

3 討論

3. 1 供試品溶液制備方法選擇

本實(shí)驗(yàn)以待測成 分提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察了提取溶劑 ( 甲醇、75% 甲醇、50% 甲醇、乙醇) 、提取 方式 ( 超 聲 提 取、回 流 提 取) 、提 取 時(shí) 間 ( 15、 30、60 min) 對(duì)供試品溶液的影響，最終確定其制 備方法為 75%甲醇超聲提取 30 min。

本實(shí)驗(yàn)以待測成分峰形、分 離度、色譜峰基線平穩(wěn)狀況為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察了流 動(dòng)相 ( 乙 腈-水、乙 腈-0. 1% 甲 酸、乙 腈0. 1%磷酸) 對(duì)測定結(jié)果的影響，最終確定乙 腈-0. 1%甲酸作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，此時(shí)待測 成分與其他雜質(zhì)的分離度符合 《中國藥典》要求， 而且色譜峰基線平穩(wěn)，峰形對(duì)稱。

本實(shí)驗(yàn)采用 HPLC 法同時(shí)測定了復(fù)方黨參片中 黨參炔苷、丹參素、丹酚酸 B、丹參酮ⅡA、補(bǔ)骨 脂素、花椒毒素、佛手苷內(nèi)酯、歐前胡素、藁本內(nèi) 酯的含有量，該方法準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，可用于 該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高和完善。