羌活為傘形科植物羌活 Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang或?qū)捜~羌活N. forbesii H. de Boiss.的干燥根莖及根，具有祛風(fēng)止痛等功效，臨床多 用于外感所致頭身關(guān)節(jié)疼痛、風(fēng)濕痹痛等。

1 儀器與材料 

1.1 儀器 

CPA225D 電子天平（德國(guó) Sartorius 公司）； 昆山舒美KQ-400KDE 超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限 公司）；DFT-50A 粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公 司）；SHB-3A 循環(huán)水多用真空泵（鄭州杜甫儀器 廠）；SB-2000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海愛(ài)朗儀器有限公 司）； ALPHA 2-4 LSC plus 真空冷凍干燥機(jī)（德國(guó) Christ 公司）；5424R 冷凍離心機(jī)（德國(guó) Eppendorf 公司）；3-18N 臺(tái)式高速離心機(jī)（湖南恒諾儀器設(shè)備 有限公司）；?80 ℃冰箱（美國(guó) Thermo Forma 公司）； DZKW-4 電熱恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限 公司）；HERAcell vios 160i CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo Scientific 公司）；CKX53 倒置光學(xué)顯微鏡（日本Olympus 公司）；1300 SERIES A2 生物安全柜（美 國(guó) Thermo Scientific 公司）；Spectramax i3x 酶標(biāo)儀 （美國(guó) Molecular Devices 公司）。 

1.2 藥品與試劑 

阿司匹林腸溶片（批號(hào) 20171202，沈陽(yáng)奧吉娜 藥業(yè)有限公司）；生理鹽水；乙醇（分析純，北京化 工廠）；甲醇（分析純，北京化工廠）；二甲苯（分 析純，北京化工廠）；DMEM 培養(yǎng)基（美國(guó) Corning 公司）；胎牛血清（FBS，美國(guó) Corning 公司）；青 霉素-鏈霉素（PS，美國(guó) Invitrogen 公司）；磷酸鹽 緩沖液（PBS，江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司）； 二甲基亞砜（DMSO，美國(guó) VWR Life Science 公司）； CCK-8 試劑盒（上海東仁化學(xué)科技有限公司）；LPS （美國(guó) Sigma 公司）；NO 檢測(cè)試劑盒（碧云天生物 技術(shù)有限公司）；小鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、 白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA 試劑盒（美國(guó) Proteintech 公司）。 羌活藥材來(lái)源于四川蠶羌、甘肅臨洮縣玉林鎮(zhèn) 條羌、甘肅漳縣金鐘鎮(zhèn)大頭羌。經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué) 孫志蓉教授鑒定為傘形科植物羌活 Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang 或?qū)捜~羌活 N. forbesii H. de Boiss. 的干燥根莖及根。 

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞 

SPF 級(jí)雄性昆明種小鼠，體質(zhì)量（20±2）g，購(gòu) 于北京斯貝福生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物使用許可證 號(hào) SCXK（京）2016-002。RAW 264.7 細(xì)胞購(gòu)自北 京協(xié)和醫(yī)學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。 

2 方法 

取羌活原藥粉末 50 g，分別加入 8 倍量乙醇加 熱回流提取 3 次，每次 1 h，濾過(guò)，合并濾液，回收 乙醇得到膏狀物，蒸餾水溶解稀釋為 1 g/mL 的濃縮 液，置于冰箱 4 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?，用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。主要 成分綠原酸、紫花前胡苷、阿魏酸、羌活醇和異歐 前胡素的測(cè)定方法及具體含量。 取羌活原藥粉末，分別精確稱取 5 g，加 10 倍 量甲醇溶液加熱回流提取 30 min，濾過(guò)，取續(xù)濾液 濃縮并置于真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行真空冷凍干燥，得凍干粉。精密稱量 100 mg 羌活凍干粉，加入適 量 DMSO 溶液使其溶解完全，配制成 100 mg/mL 的母液，保存在?20 ℃?zhèn)溆?。加藥前，再?DMEM 無(wú)血清培養(yǎng)基（僅含 1%青霉素-鏈霉素）稀釋至不 同濃度（DMSO 終質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.1%），經(jīng) 0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，即得，用于體外實(shí)驗(yàn)。主要成 分綠原酸、紫花前胡苷、阿魏酸、羌活醇和異歐前 胡素的測(cè)定方法及具體含量。

3 結(jié)果

二甲苯致小鼠耳腫脹急性炎癥實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表 1。由結(jié)果可知，與模型組比較，蠶羌和大頭羌對(duì)小 鼠耳腫脹有顯著的抑制作用（P＜0.05），且與阿司 匹林組比較，差異不顯著；條羌對(duì)小鼠耳腫脹無(wú)顯 著的抑制作用。

264.7 細(xì)胞活力的影響 羌活 對(duì) RAW 264.7 細(xì)胞活力影響結(jié)果見(jiàn)圖 1。由結(jié)果可 知，蠶羌、大頭羌、條羌醇提物在 10～80 μg/mL 對(duì) RAW 264.7 細(xì)胞活力無(wú)顯著影響（細(xì)胞存活率＞ 95%）。因此，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，可將待測(cè)樣品的質(zhì)量 濃度控制在 10～80 μg/mL。

4 討論 

炎癥是機(jī)體對(duì)于損傷性刺激做出的復(fù)雜自然性 防御反應(yīng)，且能夠激發(fā)免疫系統(tǒng)，引起血管舒張、 血液流動(dòng)性增加、炎癥介質(zhì)釋放、細(xì)胞代謝增加等。二甲苯是常用的化學(xué)致炎劑，可誘導(dǎo)組胺、 激肽及纖維蛋白溶解酶等炎癥介質(zhì)釋放，進(jìn)而引起 局部毛細(xì)血管通透性的增加、炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)、急 性滲出性炎性水腫等。NO 是一種重要的炎癥介 質(zhì)，在炎癥發(fā)生初期可以清除病原體為機(jī)體提供保 護(hù)措施，但過(guò)量的 NO 會(huì)與超氧陰離子（O ? 2 ）反 應(yīng)生成過(guò)氧化亞硝酸鹽，導(dǎo)致局部組織損傷，促進(jìn) 炎癥疾病的發(fā)生。

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