抑郁癥（Depression）是一種較為常見的情緒障礙 綜合征，其由多種生物學(xué)異常體征、癥狀組成，患 者主要表現(xiàn)為顯著持久的心境低落、悲觀厭世、思 維及認(rèn)知遲緩，并伴隨失眠等睡眠障礙，有些患者 甚至有自殺傾向。全球重度抑郁癥發(fā)病率為 4.4%， 中國(guó)發(fā)病率為 3.02%，世界衛(wèi)生組織（WHO）已將重 度抑郁癥列為全球第三大疾病負(fù)擔(dān)。目前，該疾病 的治療主要以西藥為主，如氟西汀、文拉法辛、度 洛西汀等，但存在臨床治愈率低、殘留癥狀突出、 復(fù)發(fā)率高、易導(dǎo)致臟器功能紊亂等不足，使其臨床 應(yīng)用受到限制。越來越多研究表明，中藥及其復(fù)方 制劑在治療抑郁癥方面表現(xiàn)出獨(dú)特的效果和優(yōu)勢(shì)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

健康雄性 ICR 小鼠，SPF 級(jí)，體質(zhì)量（21± 2）g，購于北京華阜康生物科技公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可 證號(hào)：SCXK（京） 2014-0004。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫（22± 2）℃，相對(duì)濕度 65%～70%，光照 12 h，自由飲食、 攝水。

1.2 藥品及試劑

SHF 皂苷部位提取物，由本課題組 制備；白樺脂醇（批號(hào)：PS14072405）、白樺脂酸（批號(hào)：PS10052503，純度 ≥ 98%），成都普思生物 科技有限公司；解郁安神顆粒（批號(hào)：20170103075）， 吉林百姓堂藥業(yè)有限公司；鹽酸文拉法辛膠囊（規(guī) 格：25 mg，批號(hào)：171003），成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股 份有限公司。戊巴比妥鈉，山東西亞化學(xué)工業(yè)有限 公 司 ； 重 酒 石 酸 去 甲 腎 上 腺 素 - 水 合 物（批 號(hào) ： 100169-199402），中國(guó)食品藥品檢定研究院；5-HT （批號(hào)：157728）、鄰苯二甲醛，北京百靈威科技公 司；多巴胺鹽酸鹽（批號(hào)：A0305），梯希愛（上海）化 成 工 業(yè) 發(fā) 展 有 限 公 司 ； L- 半 胱 氨 酸（批 號(hào) ： 2010129），天津市博迪化工有限公司；高碘酸鈉（批 號(hào) ： 20100715）， 天 津 市 大 茂 化 學(xué) 試 劑 廠 ； 鹽 酸 （AR），北京化工廠；正庚烷、碘、EDTA-2Na、無 水亞硫酸鈉、磷酸氫二鉀、氫氧化鈉、醋酸、醋酸 鈉、碘化鉀等（AR），天津基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司。

1.3 主要儀器

AUX120 型十萬分之一分析天平、 RF- 5301PC 型熒光分光光度計(jì)，日本島津公司； 昆山舒美KQ-200KBD 型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限 公司；超純水機(jī)（Millipore Ultra-pure Water），美國(guó) 密理博公司；TD5A-WS 型臺(tái)式低速離心機(jī)，長(zhǎng)沙湘 儀離心機(jī)儀器有限公司。

2 方法

2.1 分組、模型復(fù)制及給藥

小鼠隨機(jī)分成 7 組，每 組 10 只，分別為空白組（蒸餾水，10 mL·kg-1 ）、模 型對(duì)照組（蒸餾水，10 mL·kg-1 ）、文拉法辛組（9.38 mg·kg- 1 ）、解郁安神組（650 mg·kg- 1 ）、SHF 皂苷組 （30 mg·kg-1 ）、白樺脂醇組（4 mg·kg-1 ）和白樺脂酸組 （12 mg·kg- 1 ）。各組小鼠在適應(yīng)環(huán)境 3 d 后開始造 模。從造模的第 1 天開始，每天 8: 00~8: 30 灌胃給藥，持續(xù) 21 d。以禁食 24 h、禁水 24 h、夾尾、晝 夜顛倒、冷熱水游泳、睡眠剝奪等 10 種應(yīng)激因素， 21 d 內(nèi)隨機(jī)安排，每天給予任意 2 種刺激（造模日程 表略）。每種刺激不可連續(xù)出現(xiàn)，使動(dòng)物不可預(yù)見給 予 的 刺 激 ， 以 此 來 復(fù) 制 慢 性 不 可 預(yù) 期 溫 和 應(yīng) 激 （CUMS）抑郁失眠小鼠模型。

2.2 指標(biāo)檢測(cè)

各組小鼠的抑郁及睡眠情況通過國(guó)際 公認(rèn)的行為學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來反饋，作用機(jī)制的假 設(shè)則通過檢測(cè)各組小鼠腦組織的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的 含量來驗(yàn)證。

2.2.1 懸尾實(shí)驗(yàn)

（TST） 于測(cè)試當(dāng)日給藥后 1 h，將小 鼠尾部固定在一水平木棍上，使其呈倒掛狀態(tài)，四 周用紙板隔開小鼠視線。具體操作步驟及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行 6 min，前 2 min 為適應(yīng)時(shí) 間，記錄后 4 min 內(nèi)小鼠的 TST 不動(dòng)時(shí)間，即失望時(shí)間。

2.2.2 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

（FST） 于測(cè)試當(dāng)日給藥后 1 h， 將小鼠單獨(dú)放入透明玻璃缸中。玻璃缸置于安靜的 房間，保持適宜的水深及水溫。具體操作步驟及評(píng) 價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 。實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行 6 min，前 2 min 為 適應(yīng)時(shí)間，記錄后 4 min 內(nèi)實(shí)驗(yàn)小鼠的 FST 不動(dòng)時(shí) 間。單只小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清洗玻璃缸。

2.2.3 閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)

于測(cè)試 當(dāng)日給藥后 30 min，不同組別小鼠腹腔注射閾上劑 量（40 mg·kg-1 ）戊巴比妥鈉。注射后開始計(jì)時(shí)，記錄 睡眠潛伏期及睡眠時(shí)間。睡眠起始時(shí)間為翻正反射 消失時(shí)間，睡眠結(jié)束時(shí)間為翻正反射恢復(fù)時(shí)間，期 間即為小鼠睡眠時(shí)間，睡眠時(shí)間＞60 min 的小鼠， 按 60 min 記錄。腹腔注射至睡眠起始時(shí)間為睡眠潛 伏期，潛伏期超過 15 min 的小鼠，按 15 min 記錄。

2.2.4 腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量測(cè)定

不同組別小 鼠于末次給藥后 30 min，除空白組外，其他各組小 鼠均給予 1 min 懸尾刺激；刺激后立即斷頭處死小 鼠，分別取海馬及大腦皮層組織于 2 個(gè) EP 管中。采 用熒光分光光度法在指定波長(zhǎng)下測(cè)定小鼠腦組織中 海 馬 及 皮 層 區(qū) 域 的 多 巴 胺（DA）、 去 甲 腎 上 腺 素 （NE）、 5- 羥 色 胺（5- HT）的 含 量 ， 計(jì) 算 ： 含 量 （ng·g-1 ）=（F 樣品－F 組織空白）（/ F 標(biāo)準(zhǔn)品－F 試劑空白）×C 標(biāo)準(zhǔn)品× V 標(biāo)準(zhǔn)品×1.5×1/m 腦組織，F(xiàn) 表示熒光強(qiáng)度，C 表示液體濃 度，V 表示液體體積。 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用 SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行 數(shù)據(jù)分析；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x ± s）表示；多 組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA）， 兩兩比較采用 LSD 檢驗(yàn)；以 P < 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

與空白組 比較，模型對(duì)照組的 TST 不動(dòng)時(shí)間明顯增加（P< 0.01）。與模型對(duì)照組比較，文拉法辛組、解郁安神 組、SHF 皂苷組小鼠的 TST 不動(dòng)時(shí)間顯著減少，差 異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；白樺脂醇組、白樺脂 酸組的 TST 不動(dòng)時(shí)間雖有降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義（P > 0.05）。結(jié)果表明，SHF 皂苷可以通過 TST 指 標(biāo)表現(xiàn)出一定的抗抑郁作用。與空白組 比較，模型對(duì)照組的 FST 不動(dòng)時(shí)間明顯增加（P < 0.05）。與模型對(duì)照組相比，文拉法辛組、解郁安神 組、SHF 皂苷組、白樺脂酸組小鼠的 FST 不動(dòng)時(shí)間 顯著減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05，P < 0.01）。結(jié)果表明，SHF 皂苷及白樺脂酸在 FST 指標(biāo) 上表現(xiàn)出抗抑郁作用。與空白組比較， 模型對(duì)照組的睡眠潛伏期顯著延長(zhǎng)（P < 0.01），睡眠 時(shí)間縮短，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。與模型 對(duì)照組比較，各給藥組小鼠的睡眠潛伏期時(shí)間均顯 著縮短（P < 0.01）；文拉法辛組、解郁安神組、SHF 皂苷組及白樺脂酸組的小鼠閾上劑量戊巴比妥鈉所 致 睡 眠 時(shí) 間 明 顯 延 長(zhǎng) ， 差 異 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義（P < 0.05，P < 0.01）。結(jié)果表明，SHF 皂苷及白樺脂醇、 白樺脂酸可能與戊巴比妥鈉存在協(xié)同作用，可縮短睡眠潛伏期。SHF 皂苷及白樺脂酸還在一定程度具 有延長(zhǎng)睡眠時(shí)間的作用。

4 討論

抑郁癥的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明了，近年來臨 床上出現(xiàn)多種有關(guān)該病發(fā)病機(jī)制的理論或?qū)W說，如 去甲腎上腺素假說、多巴胺假說、神經(jīng)可塑性通路 調(diào)節(jié)學(xué)說等，雖然觀點(diǎn)不一，但都認(rèn)為抑郁癥的發(fā) 生與外界壓力刺激相關(guān)。抑郁癥相關(guān)研究在建立動(dòng) 物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜁r(shí)，基本都通過不同的應(yīng)激刺激來實(shí) 現(xiàn)。CUMS 抑郁失眠模型是國(guó)際上得到普遍認(rèn)可的抑 郁動(dòng)物模型之一，通過隨機(jī)給予嚙齒類動(dòng)物不同的不具威脅性的應(yīng)激因素，來模擬因外界壓力使實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物產(chǎn)生與抑郁癥患者類似的行為。



 

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