復方 小 檗 堿 鞣 酸 蛋 白 膠 囊（曾 用 名 為 瀉 痢 朗 膠囊）是貴州泛 德 制 藥 有 限 公 司 獨 家 生 產(chǎn) 的 止 瀉藥，主要用于痢疾、急慢性腸炎等。復方小檗堿 鞣酸蛋白膠囊現(xiàn)行標準為 ＷＳ－１０００１－（ＨＤ－１１１１）－２００２，該標準 含 量 測 定 項 下 采 用 紫 外 分 光 光 度 法 測定鹽酸小 檗 堿 含 量，未 對 處 方 中 的 其 他 成 分 進 行含量控制，本品處方中每粒含有鹽酸小檗堿１２０ ｍｇ、鞣酸蛋白３００ｍｇ、馬來酸氯苯那敏２ｍｇ、硝酸 硫 胺５ｍｇ、乳 酸 依 沙 吖 啶 ３０ ｍｇ 和 硅 酸 鋁 ４３ｍｇ。

１ 材料

１．１ 儀器

ＴｈｅｒｍｏＵｌｔｉｍａｔｅ３０００高效液相色譜 儀；島津 ＬＣ－２０Ａ 高效液相色譜儀；ＷａｔｅｒｓＡｌｌｉ－ ａｎｃｅｅ２６９５高效液相色譜儀；ＭＥＴＴＬＥＲＴＯＬＥＤＯ ＸＳ２０５電子天平；ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８色譜柱 （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；ＷａｔｅｒｓＸＢｒｉｄｇｅＣ１８色 譜柱 （４．６ ｍｍ ×２５０ ｍｍ，５ μｍ）；Ｔｈｅｒｍｏ Ａｃ－ ｃｌａｉｍＴＭ Ｃ１８色譜柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；昆山舒美KQ-300GDV型恒溫數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

１．２ 試藥

鹽酸小檗堿對照品（純度８６．７％，批號 １１０７１３－２０１８１４）、馬 來 酸 氯 苯 那 敏 對 照 品 （純 度 ９９．７％，批號 １００４７－２０１５０７）、硝酸 硫 胺 對 照 品 （純 度９９．８％，批號１００２９７－２０１４０２）、乳酸依沙吖啶對 照品（純度９４．３％，批號１００２９０－２０１００２），上述標準 對照品均購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇（色 譜純，美國 Ｔｅｄｉａ公司），水為超純水，其余試劑均為 分析純 （市 售）。復 方 小 檗 堿 鞣 酸 蛋 白 膠 囊 （批 號 １７０７２０１２、 １７１１２０１１、 １７１２２０１１、 １８０５２０１１、 １８０５２０１２、 １８０７２０１１、 １８０９２０１１、 １８０９２０１２、 １８０９２０２１、１９０１２０１１）均由貴 州 泛 德 制 藥 有 限 公 司 提供。

２ 方法與結(jié)果

２．１ 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

用十八烷基硅 烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液［０．０５ｍｏｌ·Ｌ－１ 磷酸二氫鉀溶液和０．０５ｍｏｌ·Ｌ－１庚烷磺酸鈉溶液 （１∶１），含 ０．２％ 三 乙 胺，并 用 磷 酸 調(diào) 節(jié) ｐＨ 值 至 ３．０］－甲醇（４３∶５７）為流動相；檢測波長為２６２ｎｍ。 理論板數(shù)按小檗堿峰計算不低于３０００，鹽酸小檗 堿、馬來酸氯苯那敏、硝酸硫胺和乳酸依沙吖啶峰 與相鄰峰之間的分離度均應符合要求。

２．２ 測定法

取本品２０粒，精密稱定，傾出內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當于鹽酸小檗堿 １２０ｍｇ），置５０ｍＬ 量瓶中，加提取溶劑［６０％甲醇 溶液（每 １００ ｍＬ 中 含 １ ｍＬ 鹽 酸）］約 ４０ ｍＬ，置 ６０ ℃的水浴中振搖溶解，放冷，用提取溶劑稀釋至 刻度，搖勻、濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液（１），用 于測定馬來酸氯苯那敏和硝酸硫胺；精密量取供試 品溶液（１）１ｍＬ置５０ｍＬ量瓶中，用提取溶劑稀釋 至刻度，搖勻，即得供試品溶液（２），用于測定鹽酸 小檗堿和乳酸依沙吖啶。精密量取供試品溶液（１） 和供試品溶液（２）各１０μＬ，注入液相色譜儀，記錄 色譜圖；另取鹽酸小檗堿、馬來酸氯苯那敏、硝酸硫 胺、乳酸依沙吖啶對照品適量，精密稱定，用提取溶 劑溶解，定量稀釋制成每１ｍＬ中約含鹽酸小檗堿 ０．０４８ｍｇ、馬 來 酸 氯 苯 那 敏 ０．０４ ｍｇ、硝 酸 硫 胺 ０．１ｍｇ和乳酸依沙吖啶０．０１２ ｍｇ的 混 合 對 照 品 溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。

２．３ 溶液配制

２．３．１ 供試品溶液制備

精密稱取復方小檗堿鞣 酸膠囊內(nèi)容物適量（約相當于鹽酸小檗堿１２０ｍｇ）， 按“２．２”項下方法制備供試品溶液（１）和供試品溶 液（２）。

２．３．２ 對照品溶液的制備

精密稱取硝酸硫胺對 照品０．０２００６ｇ、馬來酸氯苯那敏對照品０．０１３１５ ｇ、鹽酸小檗堿對照品０．０１１０８ｇ和乳酸依沙吖啶 對照品０．０１３２１ｇ，分別置２０，５０，２０ｍＬ和５０ｍＬ 量瓶中，加提取溶劑溶解并稀釋至刻度，即得相應 的對照品溶液。分別精密量取硝酸硫胺對照品溶 液０．５，１．０，１．５，２．０，３．０，４．０ ｍＬ 置 ２０ ｍＬ 量瓶 中；馬來酸氯苯那敏對照品溶液０．５，１．０，２．０，３．０， ４．０，６．０ｍＬ 置同一２０ｍＬ 量瓶中；鹽酸小檗堿對 照品溶液０．５，１．０，１．５，２．０，３．０，４．０ ｍＬ 置同一 ２０ｍＬ量瓶中；乳酸依沙吖啶對照品溶液０．２，０．５， ０．７，１．０，１．５，２．０ｍＬ 置同一２０ｍＬ 量瓶中，分別 加提取溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得線性溶液１～６， 其中線性溶液４即為含量測定用混合對照品溶液。 精密稱取硝酸硫胺對照品０．０５９６１ｇ和馬來 酸氯苯那敏對照品０．０２４９４ｇ分別置５０ｍＬ 量瓶 中，加提取溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得硝酸 硫胺和馬來酸氯苯那敏對照品貯備液。

２．３．３ 空白輔料溶液的制備

稱取廠家提供的輔 料，按處方制備成相應質(zhì)量濃度的空白輔料樣品， 按“２．２”項下方法制備空白輔料溶液。

２．４ 方法學驗證

２．４．１ 系統(tǒng)適用性試驗

按“２．３．２”項下方法制 備混合對照品溶液和空白輔料溶液，按“２．１”項下色譜條件進行試驗，各色譜峰峰型良好，各色譜峰 之間分離度均大于１．５，理論板數(shù)均在３０００以上， 空白輔料溶液無干擾。

２．４．２ 線性關系

分別吸取“２．３．２”項下線性溶 液１～６各１０μＬ注入液相色譜儀中，按“２．１”項下 色譜條件測定峰面積，記錄色譜圖。 以硝酸硫胺、馬來酸氯苯那敏、鹽酸小檗堿和 乳酸依沙吖啶對照品的質(zhì)量濃度（μｇ·ｍＬ－１）為橫 坐標，各成分的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線， 得回歸方程，見表１。結(jié)果表明，各成分在試驗的質(zhì) 量濃度范圍內(nèi)，線性關系良好。

２．４．３ 穩(wěn)定性試驗

按“２．３”項下制備供試品溶 液和混合對照品溶液，室溫下分別在０，１，２，４，６，８， １０，１２ｈ各精密吸取供試品溶液和混合對照品溶液 各１０μＬ注入液相色譜儀中，按“２．１”項下的色譜條 件測定峰面積，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液和混 合對照品 溶 液 中 硝 酸 硫 胺 ＲＳＤ 分 別 為 ０．９６％ 和 ０．２７％；馬 來 酸 氯 苯 那 敏 ＲＳＤ 分 別 為 ０．２４％ 和 ０．３８％；鹽 酸 小 檗 堿 ＲＳＤ 分 別 為 １．１８％ 和 １．１０％；乳 酸 依 沙 吖 啶 ＲＳＤ 分 別 為 ０．１９％ 和 ０．６３％。表明供試品溶液和混合對照品溶液１２ｈ 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

２．４．４ 重復性試驗

按“２．３”項下平行制備６份供 試品溶液和２份混合對照品溶液，精密吸取供試品 溶液和混合對照品溶液各１０μＬ 注入液相色譜儀 中，按“２．１”項下的色譜條件測定峰面積，記錄色譜 圖，按外標法計算含量，結(jié)果樣品中硝酸硫胺含量 為９．４２３ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ 為０．５９％；馬來酸氯苯那敏含量為３．６３３ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ 為０．２７％；鹽酸小檗堿 含量為２２２．４ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ 為０．６５％；乳酸依沙吖 啶含量為４９．１０ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ 為１．１６％。表明該 法重復性結(jié)果良好。

３ 結(jié)果與討論

３．１ 樣品測定結(jié)果分析

從１０批樣品的含量測定 結(jié)果可以看出，現(xiàn)行標準中控制含量的成分鹽酸小 檗堿有３批在限度９０％～１１０％之間，其余７批均 高于高限，現(xiàn)行標準采用重鉻酸鉀比色法測定鹽酸 小檗堿含量，通過比較２種方法的測定結(jié)果，ＨＰＬＣ 法測定結(jié)果比重鉻酸鉀比色法約高１０個百分點，因 此原方法測定鹽酸小檗堿的含量準確性還有待進 一步研究。擬定其他３個成分含量限度均為９０％ ～１１０％，則硝酸硫胺的合格率為５０％、馬來酸氯苯 那敏合格率為 ４０％、乳酸依沙吖啶合格率為 ０，１０ 批樣品總的合格率為０；從馬來酸氯苯那敏與硝酸 硫胺含量均勻度的測定結(jié)果可以看出，合格率只有 ３０％。含量均勻度的測定均值與含量基本一致，說 明方法是科學合理可行的。從含量均勻度項目每 片所測結(jié)果可以看出，樣品的均勻性是有保障的， 造成含量均勻度結(jié)果超出限度范圍的原因是馬來 酸氯苯那敏與硝酸硫胺含量均值過低，如果廠家能 保證該兩個成分的含量是在限度范圍內(nèi)，則含量均 勻度的測定結(jié)果應該是在《中國藥典》規(guī)定的限度 范圍內(nèi)。因此，含量及含量均勻度的測定結(jié)果提示 生產(chǎn)企業(yè)及相關監(jiān)管部門完善提高本品的質(zhì)量標 準是迫切且勢在必行的。

３．２ 檢測波長的選擇

實驗過程中對所測４個成 分進行了 ＤＡＤ 光譜掃描，結(jié)果鹽酸小檗堿的最大 吸收波長為２３０．３ｎｍ、２６５．９ｎｍ 和３４８．２ｎｍ；馬來 酸氯苯那敏的最大吸收波長為２２４．５ｎｍ 和２６２．０ｎｍ；硝 酸 硫 胺 的 最 大 吸 收 波 長 為 ２３７．４ｎｍ 和 ２６３．３ｎｍ；乳酸依沙吖啶的最大吸收波長為２０６．３， ２７１．６，３６９．５ｎｍ。所測４個成分中，考慮到馬來酸 氯苯那敏的含量最低，每粒只有２ｍｇ，在其最大吸 收波長２６２ｎｍ 處，其他３個成分在此波長也有很 好的吸收，且空白輔料無干擾，故選擇２６２ｎｍ 作為 含量測定的測定波長。



 

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