包蟲病是棘球絳蟲的幼蟲于人體內(nèi)所致的一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病，有“寄生蟲腫瘤”之稱， 新疆為高發(fā)區(qū)?，F(xiàn)階段以外科手術(shù)治療為首選， 但術(shù)中易播散，復(fù)發(fā)率較高。藥物治療因能降低復(fù) 發(fā)率、提高手術(shù)治愈率而不斷得到肯定。

材料與方法

1 藥品與試劑

DH-004( 新疆華世丹藥業(yè)股份有限公司，批號: 171213，純度≥95% ) ; 替硝唑?qū)φ掌? 中國食品藥 品檢定研究院，批號: 100336-201704，純度 ＞ 98% ) ; 無水甲 酸 ( 天津市光復(fù)精細化工研究所，批 號: 20110527，色譜純) ; 乙醚( 天津市富宇精細化工有 限公司，批號: 20130516，分析純) ; 甲醇( 美國 Sigma 公司，批號: 155809，色譜純) ; 乙腈( 美國 Fisher 公 司，批號: 150941，色譜純) ; 水為超純水。

2 儀器

Acquity H-Class UPLC( 美國 Waters 公司) ; QDA 單重四級桿質(zhì)譜檢測器 ( 美 國 Waters 公 司) ; NM32LA 氮氣發(fā)生器( 英國 Peak 公司) ; FJY 1002 UVF 基因研究型超純水機( 青島富勒姆科技有限公 司) ; BP211D 電子天平( 德國 Sartorius 公司) ; KQ 200VDE 雙頻數(shù)控超聲波清洗器( 昆山市超聲儀器有限公司) ; IKA MS3 數(shù)顯型渦旋振蕩器( 德國 Ika 公司) ; HC 2518 高速冷凍離心機( 安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司) ; BYN100 1 氮吹儀( 上海秉越 電子儀器有限公司) 。

3 動物

健康 Wistar 大鼠，12 只，雌雄各半，體重( 200 ± 20) g，新疆醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，合 格 證 號: SYXK( 新) 2016-0004。

4 對照品溶液配制

精密稱取 DH-004 10． 20 mg( 實際稱量) ，置于 10 mL 棕色量瓶中，加入甲醇使藥物溶解并定容制 成 1． 02 mg·mL － 1的儲備液; 精密吸取適量，用甲醇 稀釋成 0． 051，0． 102，0． 51，1． 02，2． 55 和 5． 1 μg· mL － 1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于 4 ℃ 冰箱冷藏備用。精 密稱取替硝唑 10． 20 mg，置于 10 mL 棕色量瓶中， 加甲醇使藥物溶解并定容制成 1. 02 mg·mL － 1的儲 備液; 用甲醇稀釋，配制成 8. 16 μg·mL － 1 的內(nèi) 標(biāo) 溶液。

5 色譜/質(zhì)譜條件

色譜柱: Acquity Uplc BEH C18色譜柱( 50 mm × 2． 1 mm，1． 7 μm) ; 流動相 A 為乙腈，流動相 B 為 0. 1% 甲酸，梯度洗脫: 0 ～ 0． 5 min，9% ～ 11% A; 0. 5 ～ 2． 51 min，11%A; 2． 51 ～ 4． 0 min，11% ～ 15． 5% A; 4. 0 ～ 5． 0 min，15． 5% ～ 90% A; 5． 0 ～ 5． 1 min，90% ～ 50% A; 5． 1 ～ 6． 0 min，50% A; 6． 0 ～ 8． 0 min，50% ～ 9% A; 8． 0 ～ 10． 0 min，9% A; 柱溫: 30 ℃ ; 流速: 0． 4 mL·min － 1 ; 進樣量: 5 μL。離子源: ESI; 離子檢測方 式: MＲM; 離子極性: 正離子; 錐孔電壓: 15 V; 毛細 管電壓: 0． 8 KV; 離子源溫度: 124 ℃ ; DH-004 m / z 331． 1，替硝唑 m / z 81． 0。

6 實驗動物分組

Wistar 大鼠 12 只，雌雄各半，隨機分為 2 組: 灌胃( ig) 給藥組、靜脈注射( iv) 給藥組，每組 6 只。 ig 給藥組給予 0． 5% 羧甲基纖維素鈉水溶液配置 的 DH-004 混懸 液( 50 mg·kg － 1 ) ; iv 給藥 組 給 予 2% 乙醇和生理鹽水配制的 DH-004 混 懸 液( 10 mg·kg － 1 ) 。

7 給藥及血樣采集

將大鼠禁食不禁水 12 h，按照相應(yīng)劑量分別 ig 及尾 iv 給藥。ig 給藥組于給藥前及給藥后 0. 25， 0. 5，0． 75，1，2，4，6，8，12 和 24 h 眼底靜脈叢采血 ( 0． 3 ～ 0． 4) mL; iv 給藥組于給藥前及給藥后 0. 17，0． 33，0． 5，0． 75，1，2，4，6，8 和 12 h 眼底靜脈叢采血 ( 0． 3 ～ 0． 4 ) mL，置肝素鈉抗凝離心管中，3 500 r·min － 1離心 15 min，血漿置 － 20 ℃冰箱保存。

8 血漿樣品處理

取 1． 5 mL 離心管，加入內(nèi)標(biāo)溶液20 μL，氮氣吹 干，加入血漿樣品 100 μL，超聲 5 min，渦旋 30 s，加 入 200 μL 乙腈，渦旋震蕩 3 min，12 000 r·min － 1離心 10 min，上清液進樣檢測。 9 數(shù)據(jù)處理 將樣品峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線 方程，求得不同時間點的血藥濃度。以平均血藥濃 度-時間作圖，得到 DH-004 的血藥濃度-時間利用 Kinetica 5． 0 藥動學(xué)軟件進行非房室模型分析， 得到主要藥動學(xué)參數(shù)，比較 DH-004 不同給藥途徑 在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)行為差異。

結(jié) 果

1 專屬性

取空白血漿、空白血漿加標(biāo)準(zhǔn)溶液、大鼠血漿樣 品，均按“8”項下方法處理，色譜圖見圖 1，DH-004 和內(nèi)標(biāo)的保留時間分別為 1． 7 和 5． 1 min，峰形良 好，大鼠血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾 DH-004 和內(nèi)標(biāo) 的測定，方法專屬性良好。

2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密吸取 DH-004 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各 20 μL，氮氣吹干，加入大鼠空白血漿 100 μL，按照 “8”項 下 方 法 操 作，配 制 相 當(dāng) 于 DH-004 濃 度 為 10. 2，51，102，255，510 和 1 020 ng·mL － 1 的血漿樣 品，進樣分析。以 DH-004 濃度為橫坐標(biāo)，DH-004 峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值為縱坐標(biāo)，進行線性回歸， 得到 DH-004 的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為: Y = 0. 003 3X － 0. 003 7( r = 0. 999 8) 。結(jié)果表明，DH-004 在 10. 2 ～ 1 020 ng·mL － 1 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。定量下限為 10. 2 ng·mL － 1。

3 精密度

精密吸取 DH-004 對照品儲備液，用甲醇稀釋 成質(zhì)量濃度分別為 0. 102，1. 02 和 4. 08 μg·mL － 1的 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)溶液。按照“2”項下方法配制成低、中、高 ( 濃度 20． 4，204 和 816 ng·mL － 1 ) 的質(zhì)控樣品，每個 濃度 5 份，按“8”項下方法處理后測定。同法制備 3 批，計算第 1 批批內(nèi)精密度和 3 批之間的批間精密 度。結(jié)果表明，DH-004 質(zhì)控低、中、高濃度批內(nèi)、批間 ＲSD 均 ＜ 15%，符合生物樣品檢測要求。

討 論

非房室模型法不依賴于任何房室模型假設(shè)，能 夠較客觀地描述藥物的體內(nèi)暴露和動力學(xué)行為，廣 泛應(yīng)用于新藥的藥動學(xué)與生物等效性評價。本 實驗應(yīng)用 Kinetica 5． 0 藥動學(xué)軟件對 DH-004 大鼠 血漿藥物濃度和時間進行擬合。結(jié)果發(fā)現(xiàn) DH-004 藥時曲線呈雙峰現(xiàn)象，房室模型模擬較復(fù)雜。因此， 選用非房室模型作為本實驗擬和方法。