金銀花為忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb． 的干燥花蕾或帶初開的花，為臨床常用中 藥，具有疏散風(fēng)熱、清熱解毒的功效，其總黃 酮有抗氧化、抗炎、抗心律失常、抑菌、保肝等作用，但其水溶性差，相關(guān)口服制劑 ( 金銀花糖 漿、復(fù)方金銀花顆粒等) 生物利用度低，從而限 制藥效發(fā)揮，影響臨床應(yīng)用。將金銀花總黃酮制成自微乳可能會(huì)提高其水溶性， 但目前尚無相關(guān)研究。

1 材料

1. 1 儀器

ZEN3600 型激光粒度儀 ( 英國 Malvern 公司) ; UV762 型紫外可見分光光度計(jì) ( 上海佑科 儀器儀表有限公司) ; KQ5200E 型超聲波清洗器( 昆山舒美超聲儀器有限公司) ; FA1004B 型電子精 密天平 ( 上海越平科學(xué)儀器有限公司) ; TGL-16C 型離心機(jī) ( 上海安亭科學(xué)儀器廠) ; ＲE-2000A 型 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、DF-101S 型集熱式恒溫加熱磁力攪拌 器 ( 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司) 。

1. 2 試藥

蘆丁對(duì)照品 ( 含有量≥99%，批號(hào) 100080，上海源葉生物科技有限公司) ; 金銀花總 黃酮 ( 批號(hào) 180326，自制，以蘆丁計(jì)算含有量為 74. 6%) 。金銀花購于西安市萬壽路藥材市場，經(jīng) 西安醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院邊軍昌高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為忍冬科 植物 忍 冬 Lonicera japonica Thunb． 的 干 燥 花 蕾。 D101 大孔吸附樹脂 ( 陜西藍(lán)深科技有限公司) ; 聚氧乙烯氫化蓖麻油 ( ＲH-40) 、聚氧乙烯蓖麻油 ( EL-35) ( 德國巴斯夫公司) ; 曲拉通 ( X-100，成 都市科龍化工試劑廠) ; 吐溫-80 ( 天津富宇精細(xì)化 工有限公司) ; 辛酸癸酸三甘油酯 ( 上海千為油脂 科技有限公司) ; 肉豆蔻酸異丙酯 ( 國藥集團(tuán)化學(xué) 試劑有限公司) ; 油酸乙酯 ( 天津市光復(fù)精細(xì)化工 研究所) ; 聚乙二醇 400 ( 天津市科密歐化學(xué)試劑 有限公司) ; 1，2-丙二醇 ( 天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品 開發(fā)有限公司) ; 異丙醇 ( 天津市河?xùn)|區(qū)紅巖試劑 廠) 。其他試劑均為分析純; 水為超純水。

2 方法與結(jié)果

精密稱取蘆丁對(duì)照品 20. 0 mg，置于 50 mL 量瓶中，70%乙醇溶解定容， 得 0. 400 mg /mL 對(duì)照品溶液，精密移取 0. 0、1. 0、 1. 5、2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0 mL，置于 10 mL 量瓶中，依次加入 5%亞硝酸鈉 0. 4 mL，搖勻，靜 置 6 min; 10%硝酸鋁 0. 4 mL，搖勻，靜置 6 min; 4%氫氧化鈉 4 mL，加水定容至刻度，搖勻，靜置 15 min，以相應(yīng)試劑為空白對(duì)照，在 510 nm 波長 處測定吸光度。以溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) ( X) ， 吸光度為縱坐標(biāo) ( A) 進(jìn)行回歸，得 方 程 為 A =4. 366 1X + 0. 011 3 ( r = 0. 997 1 ) ，在 0. 04 ～ 0. 16 mg /mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。稱取藥材粗粉適量，置于索氏提 取器中，石油醚連續(xù)回流至提取液無色后取出晾 干，加入 10、8、6 倍量 70%乙醇回流提取 3 次， 每次 1. 5 h，提取液合并，減壓濃縮至無醇味，6 倍量蒸餾水?dāng)嚢枞芙猓?2 h 后離心，上清液減壓 濃縮至適當(dāng)濃度，備用。將預(yù)處理好的 D101 大孔吸附 樹脂 倒 入 燒 杯 中，加入總黃酮濃縮液靜態(tài)吸附 12 h，將達(dá)到吸附飽和的樹脂裝入層析柱中，依次 用 6 BV 蒸餾水、5 BV 30%乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再 用 5 BV 70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙 醇，即得總黃酮。精密稱取干燥至恒重的總黃酮 50 mg，置于 25 mL 量瓶中，70%乙醇溶解定，精 密移取 2. 0 mL 置于 25 mL 量瓶中，按 “2. 1”項(xiàng) 下方法測定吸光度，測得總黃酮含有量為 74. 6%。

3 討論

采用 D101 大孔吸附樹脂分離純化金銀花總黃酮時(shí)，依次用適量純化水和 30%乙醇除雜， 再用 70%乙醇洗脫，發(fā)現(xiàn)純度較高，粒徑較預(yù)實(shí) 驗(yàn)沒有除雜所得的自微乳減小，載藥量顯著增大， 說明理化性質(zhì)差別較大的雜質(zhì)會(huì)對(duì)其形成產(chǎn)生特殊 影響。因此，在對(duì)中藥有效部位自微乳處方進(jìn)行研 究時(shí)，應(yīng)盡可能采用多種純化方法提高其純度。