柴胡始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為傘形科植物柴胡（Bupleurum chinense DC.）或 狹 葉 柴 胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.）的干燥根，被列為上品，是具有一種 2 000多年藥用歷史的傳統(tǒng)中藥，具有和解退熱、疏肝解 郁、升舉陽氣之功效 ?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，柴胡具 有抗炎、抗病毒、保肝、降血脂、免疫調(diào)節(jié)等作用 ，臨床 常用含柴胡的藥物有柴胡口服液、柴胡注射液、柴胡片、 柴胡滴丸等。柴胡主要含皂苷類、黃酮類、多糖類、揮發(fā) 油類等成分 ，其中皂苷類成分是其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)之 一，主要成分柴胡皂苷a和柴胡皂苷d也是柴胡含量測 定的指標(biāo)性成分。

1 材料

1.1 儀器

1260 型 HPLC 儀，包括四元梯度泵、可變波長掃描 紫外檢測器、自動進(jìn)樣器、色譜工作站（美國 Agilent 公 司）；KQ5200DE型超聲波清洗器（昆山舒美超聲儀器有限公司）；電磁裂解儀（長春中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥劑實驗室 自制，專利號：ZL201721353456.1）；L-204型萬分之一電子分析天平、AB135-S 型十萬分之一電子分析天平（瑞 士Mettler-Toledo公司）。

1.2 藥品與試劑

柴胡皂苷 a 對照品（批號：P03M9F50593，純度：≥ 98％）、柴胡皂苷d對照品（批號：Z08A8L33357，純度：≥ 98％）均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純， 其他試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 藥材

柴胡飲片（批號：171101）購于酒泉市培豐中藥材生 態(tài)種植加工有限公司，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院翁麗麗 教授鑒定為柴胡（B. chinense DC.）的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 柴胡水提液中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量測定

采用 HPLC 法測定柴胡水提液中柴胡皂苷 a、柴胡 皂苷d的含量。

2.1.1 色譜條件

色譜柱：SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～50 min， 25％A→90％A；50～55 min，90％A）；柱溫：40 ℃；流速： 1.0 mL/min；檢測波長：210 nm；進(jìn)樣量：10 μL。在該色 譜條件下，各成分分離度均大于2.5，理論板數(shù)以柴胡皂 苷a、柴胡皂苷d計均不低于35 000，陰性溶液對測定無 干擾，詳見圖2。

2.1.2 混合對照品溶液的制備

取柴胡皂苷a對照品、 柴胡皂苷d對照品各適量，精密稱定，置于同一25 mL量 瓶中，加甲醇溶解并定容，制成柴胡皂苷 a、柴胡皂苷 d質(zhì)量濃度分別為 202.80、202.00 μg/mL 的混合對照品 溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備

取藥材樣品適量，粉碎后過 篩（目數(shù)參考最優(yōu)工藝），精密稱取300.0 g，置于電磁裂 解儀中，按設(shè)定的試驗條件加入一定比例的水提取，濾 過，取濾液3.0 mL，60 ℃揮干，置于10 mL量瓶中，加甲 醇溶解并定容，搖勻，即得。

3 討論

本研究采用 HPLC 法測定了以電磁裂解法提取的柴胡水提液中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量，該方法 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均較好，可用于同時測定柴胡水 提液中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量。采用單因素試 驗對影響柴胡皂苷a和柴胡皂苷d提取的4個因素即提 取次數(shù)、提取時間、物料粒度、料液比進(jìn)行優(yōu)化。綜合考 慮單因素試驗結(jié)果及節(jié)能、省時、經(jīng)濟(jì)等因素，確定提取 次數(shù)為 1 次，僅對其余 3 個因素通過 Box-Behnken 響應(yīng) 面法進(jìn)行優(yōu)化，得到最優(yōu)提取工藝為提取時間2.50 min、 過80目篩、料液比1 ∶ 28（g/mL）。驗證試驗得總提取率為 8.42 mg/g。與超聲法和煎煮法相比，電磁裂解法提取的 總提取率最高，提取時間最短。