穿心蓮藥材 Andrographis Herba 為爵床科植 物穿心蓮 Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees 的干燥地上部分，主要含有穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮 內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、14-去氧-11,12-二去氫穿 心蓮內(nèi)酯（又稱脫水穿心蓮內(nèi)酯素）、穿心蓮苷（又 稱穿心蓮內(nèi)酯苷）及新穿心蓮內(nèi)酯苷元等二萜內(nèi)酯 類成分，具有抗菌、消炎、抗病毒、抗腫瘤等藥理 活性，主要分布于廣西、廣東、福建、湖南、 四川等地，由于各地的生態(tài)環(huán)境條件及藥材栽培管 理、采收加工方式的不同導(dǎo)致市場(chǎng)上穿心蓮藥材質(zhì) 量的差異較大。研究表明，不同來(lái)源的穿心蓮 藥材中穿心蓮內(nèi)酯類成分含量變化較大，《中國(guó) 藥典》2015 年以穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi) 酯的總量不低于 0.8% 作為穿心蓮藥材質(zhì)量考察 指標(biāo)；但僅用二者含量控制和評(píng)價(jià)穿心蓮藥材及其 制劑的質(zhì)量，難以全面反映其藥材質(zhì)量等級(jí)及優(yōu) 劣。目前穿心蓮藥材尚沒有統(tǒng)一的等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，難于 區(qū)分其質(zhì)量?jī)?yōu)劣等級(jí)。因此，開展穿心蓮藥材等級(jí) 標(biāo)準(zhǔn)研究，對(duì)穿心蓮規(guī)范化生產(chǎn)和標(biāo)準(zhǔn)化具有十分 重要的意義。但如何評(píng)級(jí)穿心蓮藥材的等級(jí)，迄今 為止，文獻(xiàn)并無(wú)具體方法的研究報(bào)道。傳統(tǒng)意義上 對(duì)穿心蓮藥材鑒別是以外觀質(zhì)量為依據(jù)的“辨狀論 質(zhì)”，而現(xiàn)代評(píng)價(jià)則多以藥效成分穿心蓮內(nèi)酯和脫 水穿心蓮內(nèi)酯含量為主，如果僅以其中一種方法判 斷其質(zhì)量?jī)?yōu)劣則有失偏頗，只有全面地結(jié)合其外觀 質(zhì)量性狀和內(nèi)在品質(zhì)等多個(gè)方面的影響因素進(jìn)行 綜合評(píng)價(jià)，才能有效地判定其質(zhì)量等級(jí)。本研究以 不同產(chǎn)地的穿心蓮藥材為研究對(duì)象，將傳統(tǒng)的外觀 質(zhì)量性狀和內(nèi)在活性成分等指標(biāo)相結(jié)合，采用統(tǒng)計(jì) 學(xué)、化學(xué)計(jì)量學(xué)等方法，開展了穿心蓮藥材的質(zhì)量 等級(jí)評(píng)價(jià)研究，建立了穿心蓮藥材的質(zhì)量等級(jí)快速 評(píng)價(jià)模型，為穿心蓮藥材等級(jí)評(píng)價(jià)及等級(jí)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 的制定提供了新思路，為其他中藥材的等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)制 定提供參考。

穿心蓮藥材采自廣東（S1～S25）、廣西（S26～ S30、S36）、福建（S31～S35）共 36 批，經(jīng)廣東藥 科大學(xué)中藥學(xué)院曾令杰教授鑒定為穿心蓮 Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees。

對(duì)照品穿心蓮內(nèi)酯（批號(hào) L23S6Y3682）、新穿心 蓮內(nèi)酯（批號(hào) Y27J8S40807）、去氧穿心蓮內(nèi)酯（批 號(hào) Y26D6S7349）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司； 脫水穿心蓮內(nèi)酯（批號(hào) J1020AS）購(gòu)自大連美倫生物 技術(shù)有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于 98%。乙腈為色譜純， 其他試劑均為分析純。島津 LC-20AT HPLC 色譜儀， Agilent 5 TC-C18（2）色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），KQ5200DE 數(shù)控超聲波清洗儀（昆山舒美儀器有限公司），BP211D 電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。

根據(jù)傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)鑒別方法，選取穿心蓮藥材的 葉含量（葉質(zhì)量占藥材總質(zhì)量的百分比）、分枝數(shù)、 株高、莖直徑（上、中、下 3 個(gè)部位）、莖顏色、 葉顏色、質(zhì)地等作為穿心蓮?fù)庥^性狀指標(biāo)進(jìn)行量化 測(cè)定。隨機(jī)抽取穿心蓮樣品每批次 20 株，分離出 其葉、莖及雜質(zhì)，分別稱定質(zhì)量，計(jì)算其葉質(zhì)量占 總質(zhì)量的百分比，作為葉含量；測(cè)量其植株的高度， 即完整植株莖基部（莖的最下部 1 cm 處）到頂部 （莖的最上部 1 cm 處）的距離，作為株高，精確至 0.01 cm；采用游標(biāo)卡尺測(cè)量植株莖基部直徑（莖的 最下部 1 cm 處）、中部直徑（株高的 1/2 處）、上部 直徑（莖的最上部 1 cm 處），精確至 0.01 mm；記 錄完整植株的一級(jí)分枝的數(shù)目作為分枝數(shù)；描述并 記錄其莖的顏色、葉的顏色、質(zhì)地等性狀。 對(duì)上述性狀進(jìn)行數(shù)量分類學(xué)的性狀編碼處理： 數(shù)值性狀（株高、莖基部直徑、莖中部直徑、莖上部直徑、分枝數(shù)、葉含量）無(wú)需編碼，直接取其測(cè) 量值的平均值；二元性狀（質(zhì)地脆與否）按“0”（否）、 “1”（是）編碼；有序多態(tài)性狀，按“0、1、2、3…” 編碼（莖、葉顏色黃色賦值“0”，黃綠“1”，灰綠 “2”，綠“3”，墨綠“4”）。

穿心蓮醇溶性浸出物參照《中國(guó)藥典》2015 年版 四部通則項(xiàng)下的熱浸法，用乙醇作溶劑測(cè)定。 研究表明穿心蓮地上部分的主要藥效成分為二 萜內(nèi)酯類化合物，其中以穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、 去氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯為其主要有效成 分。故本實(shí)驗(yàn)以這 4 種二萜內(nèi)酯為指標(biāo)采用 HPLC 測(cè) 定其含量。色譜條件：流動(dòng)相為乙腈-水（33∶67） 等度洗脫 40 min，體積流量為 1 mL/min，柱溫為室溫， 檢測(cè)波長(zhǎng)為 223 nm。參照《中國(guó)藥典》2015 年版穿心蓮項(xiàng)下的規(guī)定制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，按上 述條件進(jìn)行方法學(xué)考察（線性關(guān)系、精密度試驗(yàn)、重 復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、加樣回收率試驗(yàn)），計(jì)算相 關(guān)系數(shù) r、平均加樣回收率和 RSD，結(jié)果表明此方法 的線性關(guān)系（r＞0.999）、回收率、重復(fù)性、穩(wěn)定性和 儀器精密度（RSD 均小于 3%）均較好。按照上述條 件測(cè)定穿心蓮樣品中 4 種內(nèi)酯的含量。 2.3 數(shù)據(jù)分析 利用 SPSS 23.0 軟件做統(tǒng)計(jì)描述和相關(guān)性分析； 用 SIMCA-P 14.0 軟件進(jìn)行主成分分析（PCA）、系統(tǒng) 聚類分析（HCA）、偏最小二乘判別分析（PLS-DA） 和偏最小二乘回歸分析（PLS）等數(shù)據(jù)處理分析。不 同批次的穿心蓮樣品的質(zhì)地均一致，因此，“質(zhì)地” 這個(gè)指標(biāo)不作為分級(jí)參考指標(biāo)。各批次穿心蓮藥材的 性狀指標(biāo)和內(nèi)在質(zhì)量指標(biāo)的結(jié)果見表 1。

2.3.1 穿心蓮?fù)庥^性狀指標(biāo)和內(nèi)在質(zhì)量指標(biāo)的相關(guān)性分析

利用 SPSS 23.0 軟件對(duì)包括外觀性狀和 內(nèi)在指標(biāo)在內(nèi)的 14 個(gè)指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述和相關(guān)性 分析。 可知分枝數(shù)、莖中部 直徑的 RSD 為 9.44%、10.82%較小，說(shuō)明各批次間 差異較小。可知莖中部直徑除與莖上部直徑 相關(guān)外，與其他指標(biāo)無(wú)明顯相關(guān)，故莖中部直徑不 適合作為劃分穿心蓮等級(jí)的指標(biāo)；分枝數(shù)雖然 RSD小，但與其他外觀性狀（如莖基部直徑）和內(nèi)在指 標(biāo)（穿心蓮內(nèi)酯含量、新穿心蓮內(nèi)酯含量）相關(guān)性 較高，因此，保留其作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。其他指標(biāo)之間 均存在著較為明顯的相關(guān)性，根據(jù)傳統(tǒng)鑒別經(jīng)驗(yàn)及現(xiàn)代研究，其他指標(biāo)均可作為評(píng)價(jià)穿心蓮質(zhì)量等級(jí)的重要指標(biāo)，應(yīng)保留。

本研究探討了穿心蓮藥材性狀指標(biāo)與內(nèi)在化 學(xué)品質(zhì)的相關(guān)性，通過(guò)主成分聚類分析初步將穿心 蓮藥材分為 3 個(gè)等級(jí)，通過(guò) PLS 建立了穿心蓮藥材等 級(jí)分類的預(yù)測(cè)模型：藥材等級(jí) Y＝3.761－0.020×葉 含量－0.388×穿心蓮內(nèi)酯含量－1.117×新穿心蓮內(nèi) 酯含量－0.274×去氧穿心蓮內(nèi)酯含量－0.287×脫水穿心蓮內(nèi)酯含量－0.302×4 個(gè)內(nèi)酯總量－0.104×醇 溶性浸出物含量－0.015×莖顏色－0.008 4×葉顏 色－0.003×莖基部直徑＋0.020×分枝數(shù)＋0.137× 莖上部直徑＋0.011×株高，若 Y 在 0.7～1.3，則預(yù)測(cè) 穿心蓮藥材為一等品，若 Y 在 1.7～2.3，則預(yù)測(cè)為二 等品，若 Y 在 2.7～3.3 則預(yù)測(cè)為合格品。本研究表明 穿心蓮藥材等級(jí)與新穿心蓮內(nèi)酯含量、醇溶性浸出物 含量、4 個(gè)內(nèi)酯總量、葉含量、穿心蓮內(nèi)酯含量顯著 相關(guān)，與株高和分枝數(shù)相關(guān)，其中新穿心蓮內(nèi)酯含量、 醇溶性浸出物含量、4 個(gè)內(nèi)酯總量、葉含量、穿心蓮 內(nèi)酯含量這 5 個(gè)指標(biāo)含量越高；分枝數(shù)較少、株高較 小穿心蓮藥材的等級(jí)越優(yōu)。