茉莉酸類植物激素( Jasmonates，JAs) 是一種環(huán)戊烷衍生物，大部分含有環(huán)戊烷酮結(jié)構(gòu)，比較有代表 性的如茉莉酸( Jasmonic acid) 、茉莉酮( Jasmone) 、茉莉酸甲酯( Methyl jasmonate，MeJA) 等． JAs 可調(diào)節(jié)植 物的生長(zhǎng)發(fā)育過程，同時(shí)，JAs 也是植物抗蟲、抗菌等生物脅迫所必需的一類植物激素． 其中，茉莉酸 在植物體內(nèi)一種特殊的酶，即茉莉酸甲基轉(zhuǎn)移酶的催化作用下可發(fā)生甲基化生成茉莉酸甲酯，茉莉酸甲 酯具有揮發(fā)性，為植物內(nèi)、植物間信號(hào)的傳導(dǎo)發(fā)揮了關(guān)鍵作用． 隨著 JAs 的生理功能被不斷揭示，建立 其簡(jiǎn)便快速的分析方法對(duì)于促進(jìn)植物激素作用機(jī)理的研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義． 然而，JAs 在植物體 內(nèi)的含量很低，而植物樣品的組成往往較復(fù)雜，會(huì)對(duì)植物激素的測(cè)定產(chǎn)生極大的干擾． 因此，在進(jìn)行分析檢測(cè)之前，分離富集的前處理技術(shù)至關(guān)重要。

固相微萃取因其簡(jiǎn)單、快速、靈敏、無溶劑、成本低等，尤其是集采樣、萃取、富集、進(jìn)樣于一體的優(yōu) 點(diǎn)而得到廣泛關(guān)注． 分子印跡技術(shù)( MIT) 是指以某一特定的目標(biāo)物作為模板分子和功能單體、交聯(lián) 劑共聚制備聚合物的過程，得到的這種聚合物經(jīng)去除模板后形成的空腔對(duì)模板分子及與模板分子結(jié)構(gòu) 類似的物質(zhì)具有選擇性識(shí)別功能． 因此，將分子印跡技術(shù)引入到 SPME 涂層的制備可以解決傳統(tǒng)固相 微萃取面臨的非特異性吸附問題，有效提高 SPME 涂層對(duì)于復(fù)雜樣品的處理能力。

聚 3，4-乙烯二氧噻吩( PEDOT) 是一種有機(jī)導(dǎo)電雜環(huán)類聚合物，因其電化學(xué)活性高、環(huán)境穩(wěn)定性好、 成膜性好等優(yōu)點(diǎn)引起了諸多科學(xué)工作者的興趣． PEDOT 或摻雜后的 PEDOT 可用于電化學(xué)傳感器的 制備，也可應(yīng)用于樣品前處理． 其中，Ling 等人首次將 PEDOT 涂層用于茉莉酸類植物激素 的 SPME，但 PEDOT 中只摻雜了磺化石墨烯，對(duì)目標(biāo)物吸附的選擇性有限． 而 Pardieu 等人利用噻吩3-乙酸( AAT) 作為功能單體，與 PEDOT 共聚，制備了以除草劑阿特拉津?yàn)槟０宓姆肿佑≯E修飾電極． 因 此，本文中從提高 PEDOT 涂層選擇性的角度出發(fā)，以順式-茉莉酮( CJ) 為模板分子，AAT 為功能單體，在 不銹鋼絲上電聚合制備了對(duì)茉莉酸類植物激素具有特異性吸附的分子印跡 PEDOT 涂層( CJ-MI / PEDOT) ，用于植物樣品中植物激素的 SPME，并與氣相色譜聯(lián)用，建立了臘梅花中 CJ 和 MeJA 的 SPMEGC 分析方法，示意圖如圖 1 所示．

1 實(shí)驗(yàn)

1． 1 儀器與試劑

儀器: CHI 830D 電化學(xué)工作站( 上海晨華儀器有限公司) ; GC5400 氣相色譜儀( 江 蘇天瑞儀器股份有限公司) ; GC5400 氫火焰離子檢測(cè)器( 江蘇天瑞儀器股份有限公司) ; TM-5 毛細(xì)管色 譜柱( 上海天美科學(xué)儀器有限公司) ; S10-3 型恒溫磁力攪拌器( 上海司樂儀器有限公司) ; 電子天平( 賽多利斯) ; KQ218 超聲波清洗器( 昆山市超聲儀器有限公司) ; UPW-20N 超純水儀 ( 北京歷元電子儀器有限公司) ; DZF-6020 真空干燥箱( 上海精宏) ; SX2-2-10 管式電爐 ( 武漢電廬實(shí)驗(yàn)電爐廠) ; Spectrum One 傅里葉紅外光譜儀( 美國(guó) PEＲKIN ELMEＲ 公司) ; DIAMOND TG / DTA 熱重分析儀( 美國(guó) PEＲKIN ELMEＲ 公司) ; JSM 7100F 場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡( 日本電子株式會(huì)社) 試劑: 茉莉酸甲酯( MeJA，＞ 90% ) 和順式-茉莉酮( CJ，＞ 92% ) 購(gòu)自東京化成工業(yè)株式會(huì)社; 噻吩-3- 乙酸( AAT，＞ 98% ) 、十二烷基硫酸鈉( SDS，分析純) 和環(huán)氧樹脂( 95% ) 購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司; 3，4-乙烯二氧噻吩( EDOT，99% ，阿拉丁，上海) ; 對(duì)甲基苯磺酸( TsOH，分析純) 和磷酸氫二鈉 ( ＞ 99% ) 購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司; 氯化鈉( ＞ 99． 5% ，天津博迪化工股份有限公司) ; 甲醇 ( 色譜純) 和乙腈( 色譜純) 購(gòu)自美國(guó) TEDIA 有限公司． 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制: 配制 10 mg·mL － 1的 MeJA 和 CJ 混合甲醇溶液，并置于 4 ℃冰箱內(nèi)保存． 實(shí)驗(yàn)所有用水均為電導(dǎo)率 18． 2 MΩ·cm 的超純水．

涂層的電制備 稱取 0． 014 2 g AAT，加入 50 μL 乙腈，超聲溶解均勻; 加入 9． 5 μL CJ，超聲混合均勻后預(yù)聚合 40 min; 取 12 μL 經(jīng)減壓蒸餾純化后的 EDOT 于 10 mL 燒杯中，在 0． 1 mol L － 1 TsOH 和 5 mmol L － 1 SDS 作用下充分溶解，然后加入上述預(yù)聚合物，超聲混合均勻，形成澄清透 明溶液; 將三電極體系浸入上述配好的電解液中，采用循環(huán)伏安法( CV) 在不銹鋼絲上電沉積 CJ-MI / PEDOT 涂層，掃描電位是 － 0． 2 1． 2 V，掃速為 30 mV·s － 1，掃描圈數(shù)為 20 圈; 將聚合好的印跡涂層用 超純水淋洗后浸入 0． 1 mol L － 1 Na2HPO4甲醇溶液，采用 CV 法除去印跡涂層中的模板分子，掃描電位 為-0． 2 0． 8 V，掃速為100 mV·s － 1，掃描圈數(shù)為10 圈; 制備好的印跡涂層經(jīng)超純水淋洗后在室溫下自 然晾干，然后置于管式電爐內(nèi)，在 N2保護(hù)下進(jìn)行老化，老化溫度為 250 ℃，時(shí)間 120 min; 將冷卻后的印 跡涂層用環(huán)氧樹脂粘在自制的 SPME 手柄上，室溫下保存待用． ( 以上合并成一段) 非印跡涂層( NI / PEDOT) 的制備除了不加模板分子 CJ 外，其他步驟同上． 另外，為了便于比較，在相同條件下制備了 PEDOT 涂層．

在 15 mL 的玻璃萃取瓶中加入 8 mL 飽和 NaCl 溶液，加入 10 μL 一定濃度的 MeJA 和 CJ 混合溶液; 萃取瓶用鋁蓋密封后置于 45 ℃水浴中，設(shè)置磁力攪拌轉(zhuǎn)速為 400 r· min － 1 ; 將自制手柄的萃取頭插入萃取瓶，將 CJ-MI /PEDOT 涂層推出到瓶?jī)?nèi)溶液的上空; 萃取 20 min 后， 將涂層收回到萃取裝置內(nèi)，然后立即插入氣相色譜儀的氣化室，熱解吸 3 min，記錄氣相色譜峰面積．

氣相色譜儀進(jìn)樣口溫度為 220 ℃ ; 柱溫 160 ℃ ( 恒溫模式) ; FID 檢測(cè)器溫度設(shè)為 250 ℃ ; 不分流進(jìn)樣; 解吸時(shí)間 3 min． 1． 5 實(shí)際樣品處理 在臘梅花盛開的季節(jié)，新鮮采摘一定量的花苞與花瓣． 分別稱取 2 g 花苞和花瓣， 略微研磨后各加入 5 mL 甲醇，超聲提取 1 h; 提取完成后，以 4 000 r min － 1的轉(zhuǎn)速離心 20 min，取上清液 氮吹至近干; 余下物質(zhì)用少量飽和 NaCl 溶液重新溶解，并用 0． 22 μm 的針孔濾膜過膜，濾液轉(zhuǎn)移至 100 mL 容量瓶定容，密封后置于 4 ℃冰箱內(nèi)保存待用．

CJ-MI /PEDOT 涂層 中 3 098 cm － 1處的吸收峰可以歸因于—COOH 中 O—H 的振動(dòng)吸收，2 905 cm － 1處的吸收峰應(yīng)該為—CH3 中飽和 C—H 的伸縮振動(dòng)吸收，這些吸收峰都來自于 AAT 分子結(jié)構(gòu)中官能團(tuán)的特征吸收; 而 1 618 cm － 1 處的吸收峰可能歸因于噻吩環(huán)中 C C  的伸縮振動(dòng)，1 085 cm － 1處的吸收峰應(yīng)歸屬于噻吩環(huán)的 C—O— C 振動(dòng)吸收，而 980、831 cm － 1處的吸收峰可能由 C—S 的伸縮振動(dòng)引起，這些都屬于 PEDOT 分子結(jié)構(gòu)中 官能團(tuán)的典型吸收峰． 以上結(jié)果表明，在電聚合過程中 AAT 已成功共聚在 PEDOT 分子結(jié)構(gòu)中． 采用掃描電鏡技術(shù)對(duì) CJ-MI /PEDOT 涂層的形貌進(jìn)行了表征，該涂 層在不銹鋼絲外的分布比較均勻; 圖 3b 可看出該材料具有豐富的孔隙結(jié)構(gòu); 是 PEDOT 結(jié)構(gòu)的典型特點(diǎn);  綜上，CJ-MI /PEDOT 涂 層具有多孔的顆粒狀結(jié)構(gòu)，這使其具有較大的比表面積，為傳質(zhì)提供了有利條件，適合用于 SPME． 采用熱重分析技術(shù)對(duì) CJ-MI /PEDOT 涂層的熱穩(wěn)定性進(jìn)行了考察，結(jié)果如圖 4 所示． 由圖可見，該涂 層在 30 800 ℃的范圍內(nèi)發(fā)生了兩次失重: 第一次為 30 100 ℃，為涂層中所吸收水分的揮發(fā)所致; 第 二次從 290 ℃開始，應(yīng)為 PEDOT 的分解所致． 在 100 290 ℃范圍內(nèi)，該涂層比較穩(wěn)定，說明 CJ-MI / PEDOT 涂層可在 290 ℃內(nèi)保持穩(wěn)定，適合與氣相色譜聯(lián)用。

本研究采用電化學(xué)方法制備以 CJ 為模板分子的 PEDOT 涂層，并與氣相色譜聯(lián)用，建立了 CJ-MI /PEDOT-GC 方法，成功應(yīng)用于植物組織中茉莉酸類植物激素的檢測(cè)． 該方法提高了 PEDOT 涂層對(duì)于目 標(biāo)物的選擇性，且得到的多孔涂層熱穩(wěn)定性高、使用壽命長(zhǎng)，對(duì)目標(biāo)物也表現(xiàn)出良好的選擇性萃取能力; 與氣相色譜聯(lián)用檢測(cè)臘梅中的 CJ 和 MeJA，檢測(cè)限低、靈敏度高、線性范圍寬，適用于植物組織中茉莉酸 類植物激素的分析檢測(cè)。