新疆巴爾喀什蘑菇（Ａｇａｒｉｃｕｓｂａｌｃｈａｓｃｈｅｎｓｉｓ Ｓａｍｇｉｎａ＆ Ｇ．Ａ．Ｎａｍ）屬 擔(dān) 子 菌 亞 門（Ｂａｓｉｄｉｏ－ ｍｙｃｏｔｉｎａ），層 菌 綱 （Ｈｙｍｅｎｏｍｙｃｅｔｅｓ），傘 菌 目 （Ａｇａｒｉｃａｌｅｓ），蘑 菇 科 （Ａｇａｒｉｃａｃｅａｅ），蘑 菇 屬 （Ａｇａｒｉｃｕｓ），俗稱博 湖 蘑 菇、焉 耆 黑 蘑 菇、蘆 葦 蘑菇等，屬于中亞地區(qū)特有種，主要生長在內(nèi)陸湖泊 沿岸，蘆葦腐殖質(zhì)豐富的沙灘上，常埋于沙層中。 據(jù)現(xiàn)有報(bào)道，國外僅在哈薩克斯坦有分布，國內(nèi)目 前僅在新疆有分布，主要分布于博湖縣海心山 和烏蘭鄉(xiāng)的蘆葦灘上。

１ 材料與方法 

１．１ 試驗(yàn)材料 

野生巴爾喀什蘑菇，采集于新疆博湖 縣 博 斯 騰湖蘆葦灘。 硼酸、鎂粉、碘、碘化鉀、碘化鉍鉀、硅鎢酸、磷 鎢酸、磷鉬酸、三 氯 化 鐵、鐵 氰 化 鉀、α－萘 酚、三 氯 化鋁、氫氧化鈉、間二硝基苯、氫氧化鉀、乙酸鎂、 氫氧化鉀、冰 乙 酸、鹽 酸 羥 胺、亞硝酰鐵氰化鈉、 ３，５－二硝基苯甲酸、香草醛、氯化鈉、溴酚藍(lán)、硫酸 銅、茚三酮、酒石酸鉀鈉、正丁醇、三氯甲烷、醋酐、 甲酸、甲醇、無水乙醇、硝酸鋁、濃鹽酸、濃硫酸、濃 氨水、雙氧水等均為分析純，ＨＰＦｕｎｇａｌＤＮＡ Ｋｉｔ 試劑盒、２×ＴａｑＰＣＲ ＭａｓｅｒＭｉｘ （天 根 生 化 科 技 （北京）有限公司）。 ＪＸＦＳＴＰＲＰ－９６全自動(dòng)樣品快速研 磨 儀 （上 海凈信科技）、ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏＡＢ２６５－Ｓ分析天平 （瑞士梅 特 勒－托 利 多 公 司）、ＯＳＢ－２１００ 旋 轉(zhuǎn) 蒸 發(fā) 器（上海愛郎儀器有限公司）、恒溫電加熱套（北京 市永光明醫(yī)療儀器廠）、超聲清洗器（昆山舒美超聲儀器有限公司）、電熱恒溫水浴鍋（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京 市永光明醫(yī)療儀器廠） 

１．２ 試驗(yàn)方法 

１．２．１ 野生巴爾喀什蘑菇的分離純化

 采用組織分離法進(jìn)行分離純化，選擇 菇 蓋 肥 厚，無病蟲害的子實(shí)體作為分離材料，先將采集的 野生菇用無菌水清洗表面，再用７５％酒精表面消 毒，在菌 蓋 與 菌 柄 交 接 處 取 ０．３～０．４ｃｍ３ 的 組 織，移放到ＰＤＡ 斜面培養(yǎng)基中央，置于２５℃恒溫 培養(yǎng) 箱 內(nèi) 培 養(yǎng)，定期觀察菌絲生長情況，并 純 化 保存。 

１．２．２ ＩＴＳ序列測定

 于博湖博 斯 騰 湖 蘆 葦 灘 上 共 采 集 樣 本 ３ 個(gè) （ＢＨ０１～ＢＨ０３），對其進(jìn)行全基因組 ＤＮＡ 提取。 對采集的子實(shí)體進(jìn)行干燥處理，取一部分干燥子 實(shí)體，采用 Ｅｚｕｐ柱式真菌基因組 ＤＮＡ 抽提試劑 盒進(jìn)行總 ＤＮＡ 的提取。 采用通 用 引 物 ＩＴＳ１：ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣ－ ＣＴＧＣＧＧ 和 ＩＴＳ４： ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧ－ ＧＡＴＡＴＧＣ（由 生 工 生 物 工 程 股 份 有 限 公 司 合 成）進(jìn)行 ＰＣＲ 擴(kuò) 增。ＰＣＲ 反 應(yīng) 體 系：１０×Ｂｕｆｆｅｒ （ｗｉｔｈＭｇ２＋ ）２．５μＬ、ｄＮＴＰ１．０μＬ、酶０．２μＬ、 引物（１０μｍｏｌ·Ｌ－１）各０．５μＬ、模板０．５μＬ，無 菌雙蒸水補(bǔ)足至２５μＬ。ＰＣＲ 擴(kuò)增程序：９４ ℃預(yù) 變性４ｍｉｎ，９４℃變性４５ｓ，５５℃退火４５ｓ，７２℃ 延伸１ｍｉｎ，３０ 個(gè) 循 環(huán)，７２ ℃ 修 復(fù) 延 伸 １０ ｍｉｎ。 ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物用１．０％瓊脂糖凝膠電泳檢測，用 純化試劑盒（天根生化科技（北京）有限公司）進(jìn)行 純化。 將純 化 后 ＰＣＲ 產(chǎn) 物 交 于 生 工 生 物 工 程（上 海）股份有限公司進(jìn)行克隆測序。測序結(jié)果利用 ＤＮＡｓｔａｒ軟件進(jìn)行 拼 接，后 提 交 至 ＮＣＢＩ核 酸 數(shù) 據(jù)庫（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／），進(jìn) 行 ＢＬＡＳＴ 比對分析。選取同源性較高的序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化 分析，利用 ＭＥＧＡ６．０軟件首先進(jìn)行多重序列比 對，再 采 用 Ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ 法 構(gòu) 建 系 統(tǒng) 發(fā) 育 樹，進(jìn)行１０００次 Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ自舉法檢驗(yàn)。 

１．２．３ 系統(tǒng)化學(xué)預(yù)試驗(yàn)溶液的制備 

水浸液：稱取巴爾喀什菇子實(shí)體粗粉１０ｇ，置 于２５０ｍＬ 的三角燒瓶中，加蒸餾水８０～１００ｍＬ 室溫浸泡過 濾。過 濾 出 約２０ｍＬ 濾 液 供 檢 測 氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)等成分用。

２ 結(jié)果與分析

野生巴爾喀什蘑菇群生或散生，子實(shí)體個(gè)體 一般較大，埋于沙土之下。菌蓋表面光滑，生長初 期呈 半 球 形，成 熟 后 逐 漸 平 展；菌 褶 致 密 且 不 等 長，生長初期為污白色，后逐漸變?yōu)榈凵?、褐色? 黑褐色，最后呈黑色；菌柄中生，短粗，上部近圓柱 形，基部略膨大；菌環(huán)位于菌柄上部，膜質(zhì)呈乳白 色，易脫落；菌肉致密厚實(shí)，用刀切開，顏色變化為 白色、淡粉色、淡紅色、紅褐色、褐色，最后呈淡黑 褐色；另 外，其孢子印呈紅褐色至黑褐色。 于 ＰＤＡ 培養(yǎng)基上培養(yǎng)巴爾喀什蘑菇，菌 落 呈 白 色， 菌絲濃密，氣生菌絲較旺盛，見圖１。經(jīng)新疆農(nóng)業(yè) 大學(xué)趙震宇教授根據(jù)形態(tài)特征及顯微結(jié)構(gòu)鑒定為 巴爾喀什蘑菇（ＡｇａｒｉｃｕｓｂａｌｃｈａｓｃｈｅｎｓｉｓＳａｍｇｉｎａ ＆ Ｇ．Ａ．Ｎａｍ）。

３ 結(jié)論與討論

 巴爾喀什蘑菇是新疆特有的一種美味食用 菌，食用歷史悠久，深受當(dāng)?shù)孛癖姷南矏?。其曾? 定名 為 圓 孢 蘑 菇 （Ａｇａｒｉｃｕｓｇｅｎｎａｄｉｉ （Ｃｈｏｔ．ｅｔＢｏｕｄ．）Ｏｒｔｏｎ），后１９８９年經(jīng)趙 震 宇 教 授 與 哈 薩 克斯坦國科學(xué)院植物研究所標(biāo)本室核對標(biāo)本，命 名為 巴 爾 喀 什 蘑 菇 （Ａｇａｒｉｃｕｓｂａｌｃｈａｓｃｈｅｎｓｉｓ Ｓａｍｇｉｎａ：Ｇ．Ａ．Ｎａｍ）。該研究以采自博斯騰 湖的野生蘑 菇 為 試 驗(yàn) 材 料，采 用 形 態(tài) 學(xué) 和ｒＤＮＡ ＩＴＳ序列對其進(jìn)行 分 子 鑒 定，明 確 其 為 巴 爾 喀 什 蘑菇。并采用系統(tǒng)化學(xué)預(yù)試法對其子實(shí)體中的化 學(xué)成分進(jìn)行初步測定，結(jié)果顯示，野生巴爾喀什蘑 菇子實(shí)體中含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、還原糖、多 糖、苷類、皂苷類、有機(jī)酸、酚類、鞣 質(zhì) 類、甾 體 類、 三萜類、黃酮類、內(nèi)酯類、揮發(fā)油類等化學(xué)成分，證 明其營養(yǎng) 成 分 豐 富，具 有 開 發(fā) 價(jià) 值。

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