化學(xué)計(jì)量學(xué)是一門(mén)通過(guò)數(shù)學(xué)或統(tǒng)計(jì)學(xué)方法將對(duì)化學(xué)體 系的測(cè)量值與體系的狀態(tài)之間建立聯(lián)系的學(xué)科，它的特點(diǎn) 是可以最有效地獲取體系有用的特征數(shù)據(jù)，并通過(guò)解析測(cè) 量數(shù)據(jù)最大限度地從中提取有關(guān)物質(zhì)的定性、定量、形態(tài)、 結(jié)構(gòu)等信息。化學(xué)計(jì)量學(xué)不僅在數(shù)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，在 中藥鑒別、質(zhì)量控制等研究中也越來(lái)越被接受和使用。 本研究運(yùn)用化學(xué)計(jì)量學(xué)對(duì)不同采集地山楂葉藥材中采用面 積歸一化法所得 15 種成分的峰面積比例進(jìn)行統(tǒng)計(jì); 應(yīng)用聚 類(lèi)分析與主成分分析得到 30 批藥材; 利用判別分析建立質(zhì) 量數(shù)學(xué)表達(dá)式。

1 儀器與材料

1. 1 儀器

安捷倫 1200 型高效液相色譜儀 ( 美國(guó)安捷倫 公司) ; AG-245 型分析天平 ( 瑞士梅特勒-托利多公司) ; LBY-N6K 型全自動(dòng)血流變儀 ( 北京市普利生儀器有限公 司) ; KQ700 型超聲波清洗器 ( 昆山超聲儀器有限公司) 。

1. 2 動(dòng)物

Wistar 雄性 SPF 級(jí)大鼠，體質(zhì)量 200 ～ 220 g， 購(gòu)于北京市維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許 可證號(hào) SCXK ( 京) 2012-0001。

1. 3 試劑

金絲桃苷 ( 批號(hào) 111521-200303) ，購(gòu)于中國(guó)食 品藥品檢定研究院; 牡荊素鼠李糖苷 ( 批號(hào) 151024) 、牡 荊素葡萄糖苷 ( 批號(hào) 151103) ，購(gòu)于上海融禾有限公司， 上述對(duì)照品含有量≥98%。烏拉坦 ( 20150401) ，購(gòu)于天津 光復(fù)精細(xì)化工研究所; 鹽酸腎上腺素 ( 批號(hào) 1505301) ，購(gòu) 于天津市金耀藥業(yè)有限公司。乙腈、甲醇為色譜純，購(gòu)于 美國(guó) Fisher 公司; 水為娃哈哈純凈水; 其他試劑為分析純。

1. 4 試藥

山楂葉為薔薇科植物山楂 Crataegus pinnatifida Bge． 的干燥葉，由承德民族師范學(xué)院董建新教授鑒定為正 品，具體見(jiàn)表 1。山楂葉制法 A ( 模擬山楂葉成藥山玫 膠囊，山楂葉以 50%乙醇為提取液) 、山楂葉制法 B ( 山楂 葉藥材加 5 倍量 50%乙醇，加熱回流提取 2 次，合并提取 液用 3 倍量水飽和正丁醇溶液提取 3 次，合并的正丁醇提 取液濃縮至干，即得) 、山楂葉制法 C ( 模擬山楂葉成 藥益心酮片，以山楂葉提取物 D 為原料制成制劑) 、山楂葉制法 D ( 50%乙醇提取液，通過(guò)收集大孔吸附樹(shù)脂柱不 同體積分?jǐn)?shù)乙醇洗脫液，回收乙醇得清膏) 。


2 方法與結(jié)果

2. 1 HPLC 法建立

2. 1. 1 色譜條件

Aglient Zorbax SB-C18 柱 ( 250 mm× 4. 6 mm，5 μm) ; 流動(dòng)相 0. 1%甲酸水 ( A) -乙腈 ( B) -四 氫呋喃 ( C) ; 梯度 洗 脫 ( 0 ～ 5 min，10% ～ 12% B; 5 ～ 15 min，12%B; 15 ～ 20 min，12%B，前 20 minC 占 0。20 ～ 23 min，12% ～ 14% B; 23 ～ 35 min，14% B; 35 ～ 40 min， 14% ～ 20% B; 40 ～ 50 min，20% ～ 30% B; 50 ～ 60 min， 30% ～ 60%B; 60 ～ 65 min，60% ～ 80% B，20 min 以后 C 占 8%) ; 檢 測(cè) 波 長(zhǎng) 320 nm; 體 積 流 量 1. 0 mL/min; 柱 溫 30 ℃ ; 進(jìn)樣量 10 μL。

2. 1. 2 供試品溶液制備

精密稱取山楂葉 D ( 2015 年版 《中國(guó)藥典》方法) 約 0. 05 g，置 50 mL 具塞錐形瓶中，精 密移取 60%甲醇 25 mL，精密稱定質(zhì)量，超聲處理 30 min， 待冷卻后補(bǔ)足減失質(zhì)量，上清液以 0. 45 μm 微孔有機(jī)濾膜 過(guò)濾，即得。

2. 1. 3 對(duì)照品溶液制備

精密稱取金絲桃苷 15. 5 mg、牡 荊素 葡 萄 糖 苷 22. 0 mg、牡 荊 素 鼠 李 糖 苷 20. 0 mg，置 50 mL棕色量瓶中，甲醇溶劑定容，即得 ( 質(zhì)量濃度分別 為 0. 31、0. 44、0. 40 mg /mL) ，密封備用。

2. 1. 4 樣品測(cè)定方法

按 “2. 1. 2”項(xiàng)下方法制備供試品 溶液，在 “2. 1. 1”項(xiàng)條件下進(jìn)樣，色譜圖見(jiàn)圖 1。

2. 2 方法學(xué)考察

2. 2. 1 精密度試驗(yàn)

取 “2. 1. 3”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適 量，在 “2. 1. 1”項(xiàng)條件下連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定 6 次，測(cè)得金絲桃 苷、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷峰面積 ＲSD 分別為 1. 88%、1. 06%、0. 95%，表明儀器精密度良好。

2. 2. 2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取 “2. 1. 2” 項(xiàng)下供試品溶液 ( 24 號(hào)) 適量，在 “2. 1. 1”項(xiàng)條件下于 0、2、4、8、12、24 h 測(cè)定，測(cè)得金絲桃苷、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷 峰面積 ＲSD 分別為 1. 45%、1. 04%、0. 78%，表明供試品 溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2. 2. 3 重復(fù)性試驗(yàn)

取 同 一 批 樣 品 ( 24 號(hào)) 適 量，按 “2. 1. 2” 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平 行 6 份，在“2. 1. 1”項(xiàng)條件下進(jìn)樣，測(cè)得金絲桃苷、牡荊素葡萄糖苷、 牡荊 素 鼠 李 糖 苷 峰 面 積 ＲSD 分 別 為 1. 49%、0. 88%、 0. 52%，表明該方法重復(fù)性良好。

2. 2. 4 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批樣品 ( 24 號(hào)) 適量， 分別加入一定量的金絲桃苷、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠 李糖苷，按 “2. 1. 2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液 6 份，在 “2. 1. 1”項(xiàng)條件下進(jìn)樣，測(cè)得金絲桃苷、牡荊素葡萄糖苷、 牡荊素 鼠 李 糖 苷 加 樣 回 收 率 分 別 為 99. 43%、99. 66%、 99. 80%，ＲSD 分 別 為 2. 20%、1. 16%、0. 51%，結(jié) 果 與 2015 版 《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)符合。

3 討論

山楂葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)包括 性狀鑒定、薄層色譜鑒別以及山楂葉總黃酮和金絲桃苷的 測(cè)定。目前的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)存在質(zhì)控指標(biāo)單一，與藥效關(guān)聯(lián)性 不強(qiáng)等問(wèn)題。本研究在課題組成果-山楂葉指紋圖譜基礎(chǔ) 上，以中藥多組分作用特點(diǎn)，盡可能多的選取色譜峰為研 究目標(biāo)，同時(shí)采用面積歸一化法測(cè)定了指標(biāo)成分的比例值， 面積歸一化法可體現(xiàn)每種成分所占總成分的含有量百分比， 與中藥多組分、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)相呼應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)又利用 化學(xué)計(jì)量學(xué)中聚類(lèi)分析和主成分分析法，以指標(biāo)成分比例 值為分析目標(biāo)，從不同采集地中排除安徽、廣東乳源、廣 東南昆山、廣西桂林、廣西賀州、廣西梧州、廣西玉林及 山東維安，最終剩余多個(gè)采集地的山楂葉質(zhì)量可靠、穩(wěn)定。 篩選出的山楂葉樣品采用判別分析，建立了質(zhì)量數(shù)學(xué)表達(dá) 式，如有未知質(zhì)量的山楂葉樣品，可把每個(gè)色譜峰面積比 例值直接帶入數(shù)學(xué)式中，當(dāng) Y 值范圍在 13. 15 ～ 16. 08 時(shí)， 未知山楂葉質(zhì)量符合要求，該藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的方法簡(jiǎn)便、可靠。