格列喹酮作為第二代磺脲類口服降糖藥物，因 口服吸收快、作用時間短的特點而在臨床上被廣泛 使用，但是臨床上存在低血糖發(fā)生的風險。丹參 因其活血化瘀、祛瘀止痛之功效常用于血瘀證的 治療。丹參注射液和格列喹酮在臨床上常用于糖尿 病及其并發(fā)癥的治療，但是丹參注射液對格列喹酮 藥物代謝動力學參數(shù)是否有影響尚不清楚。本研究 考察了丹參注射液對格列喹酮在糖尿病大鼠體內(nèi)血 藥濃度的影響，建立原位在體腸循環(huán)動物模型研究 丹參注射液對格列喹酮在糖尿病大鼠體內(nèi)腸吸收的 影響，觀察丹參注射液對格列喹酮藥物代謝動力學 參數(shù)及腸吸收特性的影響，為今后兩藥的臨床合用 提供依據(jù)。

１ 材料

１．１ 試劑

丹參注射液（批號 １７０５０８３）：上海中西 制藥有限 公 司；格 列 喹 酮 標 準 品（批 號 Ｄ０７Ｆ６Ｊ１）： 上海源葉生物科技有限 公 司；鏈 脲 佐 菌 素（ｓｔｒｅｐｔｏ－ ｚｏｔｏｃｉｎ，ＳＴＺ；批 號 ＥＺ２９２１Ｂ４００）：美 國 Ｓｉｇｍａ 公 司；格列喹酮 片（糖 適 平，批 號 １１４０６３７）：北京 萬 輝 雙鶴藥業(yè)有限責任公司；甲醇、乙腈（色譜純）：天津市大茂化學試 劑 廠；水 為 Ｍｉｌｌ－Ｑ 超純 水；其 余 試 劑 均為分析純。

１．２ 儀器

ＨｙｐｅｒｓｉｌＢＤＳＣ１８色譜柱：大連依利特 公司；Ｗｓｔｅｒｓ１５２９ 高效液相色譜儀：美 國 Ｗａｔｅｒｓ 公司；２２０－Ａ 型數(shù)顯電熱恒溫干燥箱：上海陽光實驗 儀器有限公司；KQ2200型超聲波清洗器：昆山舒美超聲儀器有限公司；ＴＧ１６－ＷＳ臺式高速離心機：長沙 湘儀離心機儀器有限公司；ＺＸＺ－Ｚ型循環(huán)水式真空 泵：河南一恒儀器有限公司。

１．３ 動物

健 康 ＳＤ 大鼠 ２０ 只，雌 雄 不 限，ＳＰＦ 級，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為１８～２６ ℃，月齡１～２個月，體 質(zhì)量（２２０±１０）ｇ，由安徽醫(yī)科大學實驗動物中心［動 物生產(chǎn)許可證號：ＳＣＸＫ（皖）２０１７－００１；動物 使 用 許 可證號：ＳＹＸＫ（皖）２０１７－００６］提供。

２ 方法

２．１ 糖尿病大鼠模型的制備

所有動物適應性喂 養(yǎng)１周后，模型復制前禁食１２ｈ（一般過夜禁食，不 禁水），ＳＴＺ按每 千 克 體 質(zhì) 量６５ｍｇ的劑 量 一 次 性 腹腔注射，臨用前用枸櫞酸緩沖液（０．１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ ４．５）配制。７２ｈ后檢測空腹血糖，空腹血糖濃度＞ １６．６ｍｍｏｌ／Ｌ即為模型復制成功。

２．２ 色譜條件

Ｈｙ－ ｐｅｒｓｉｌＢＤＳＣ１８（４．６ｍｍ×２００ｍｍ，５μｍ）；流動相： 乙腈－水（６５∶３５），過濾 并 脫 氣；流 速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ； 檢測波長：２９４ｎｍ；柱溫：２５ ℃；進樣量：２０μＬ。

２．３ 樣品的處理方法

精密吸取大鼠血漿２００μＬ， 加入１ｍＬ二氯甲烷，渦旋混勻２ｍｉｎ后，４０００ｒ／ｍｉｎ離心１０ ｍｉｎ，取二 氯 甲 烷 層，５０ ℃氮氣 吹 干，加 入 ２００μＬ甲醇復溶，渦旋混勻２ｍｉｎ，１２０００ｒ／ｍｉｎ離心 １０ｍｉｎ后，取上清液２０μＬ進樣。 精密吸取人工腸液樣品（Ｔｙｒｏｄｅ液）２００μＬ， 加入１ｍＬ二氯甲烷，渦旋混勻２ｍｉｎ后，４０００ｒ／ｍｉｎ 離心 １０ ｍｉｎ，取 二 氯 甲 烷 層，５０ ℃ 氮 氣 吹 干，加 入 ２００μＬ流動相復溶，渦旋混勻２ｍｉｎ，１２０００ｒ／ｍｉｎ離心 １０ｍｉｎ后，取上清液２０μＬ進樣。

２．４ 藥物代謝動力學研究

選 取１２只糖 尿 病 大 鼠，隨機分為格列喹酮組和丹參－格列喹酮組。格列 喹酮組單獨灌胃給予１５ｍｇ／ｋｇ（按照人與大鼠等效 劑量比值６倍換算，相當于藥品說明書建議成人每 日臨床劑量２．５ｍｇ／ｋｇ）的格列喹酮混懸水溶液；丹 參－格列喹酮組先腹腔注射２ｍＬ／ｋｇ（藥品說明書建 議成 人 每 日 臨 床 劑 量 ０．５ｇ／ｋｇ）的 丹 參 注 射 液 ５ ｍｉｎ后，灌胃 給 予１５ ｍｇ／ｋｇ的格 列 喹 酮 混 懸 水 溶 液。兩組均在給予格列喹酮后０．５、１、１．５、２、２．５、 ３、４、６、８ｈ經(jīng)眼眶取血０．３ｍＬ血樣，所取血樣分別 置于１．５ｍＬ涂有肝素鈉的微型離心管中，靜置３０ ｍｉｎ后，在４０００ｒ／ｍｉｎ下離心１０ｍｉｎ，取上層血漿 ２００μＬ，按“２．３”項下操作，記錄峰面積，計算血藥濃 度，并繪制平均血藥濃度－時間曲線圖。

２．５ 腸吸收實驗

將糖尿?。樱?大鼠（禁食１２ｈ、自由 飲 水）隨 機 分 為 兩 組（格 列 喹 酮組和丹參－格列喹酮組），每組４只，稱質(zhì)量后腹腔 注射１０％水合氯醛（３．５ｍＬ／ｋｇ），麻醉后固定并維 持體溫，沿腹中線打開腹腔，暴露小腸，兩組大鼠均 選取全腸段（選取腸段標準如下：十二指腸自幽門１ ｃｍ 處開始向 下，盲 腸 上 行 １０ｃｍ 止），腸段 兩 端 切 口，用預 熱 至３７ ℃的生理鹽水將腸內(nèi)容物沖洗干 凈，切口兩端分別插管，結(jié)扎固定。傷口處用浸有生 理鹽水脫脂棉覆蓋保濕，保溫３７ ℃。以１０μｇ／ｍＬ 格列喹酮－Ｔｙｒｏｄｅ灌注 液４０ｍＬ 進行 腸 循 環(huán) 灌 注， 流速為０．２ｍＬ／ｍｉｎ，待灌注液充滿整個循環(huán)通路 時記為０時刻，循環(huán)灌注１８０ｍｉｎ后結(jié)束，期間每隔 ２０ｍｉｎ取循環(huán)液１ｍＬ 并檢測其中格列喹酮含量。 丹參－格列喹酮組在１０μｇ／ｍＬ格列喹酮－Ｔｙｒｏｄｅ液灌 注前５ｍｉｎ，經(jīng)尾靜脈注射丹參注射液（２ｍＬ／ｋｇ），再 按上述方法 進 行 實 驗，兩組均設置空白大鼠對照。 

3 結(jié)果

格列喹酮單獨灌胃以及與丹參注射 液合用后其藥物代謝動力學過程在糖尿病大鼠體內(nèi) 均符合一室模型。結(jié)果表明，在與丹參注射液合用后， 格列喹酮在糖尿病大鼠體內(nèi)的藥物代謝動力學參數(shù) 發(fā)生了顯著的改變。達峰 時 間 從２．７０ｈ縮短 到 了 ２．０８ｈ；最 大 藥 物 濃 度 從 ６．３５μｇ／ｍＬ 增 加 到 了 ２４．１４μｇ／ｍＬ，大約提高了３．８倍，差異有統(tǒng)計學意義 （Ｐ＜０．０５）；藥－時曲線下面積從３７．３５ｍｇ／（Ｌ·ｈ）提 高至８９．４２ ｍｇ／（Ｌ·ｈ），差 異 有 統(tǒng) 計 學 意 義 （Ｐ＜ ０．０５）；并且清除率大約縮小了２倍，差異有統(tǒng)計學 意義（Ｐ＜０．０５）。與格列喹 酮 組 相 比，丹 參－格列喹酮組的吸收速 率 Ｋａ從（８．５３±１．２９）×１０－３／ｓ增加 到（２１．３９± ７．４７）×１０－３／ｓ；Ｐａｐｐ從（１．８２±０．２２）×１０－８ｃｍ／ｓ 增加到（４．３５±１．３５）×１０－８ｃｍ／ｓ；丹參－格列喹酮組 的 Ｋａ 和 Ｐａｐｐ 值 顯 著 增 加，差 異 有 統(tǒng) 計 學 意 義 （Ｐ＜０．０５）。這表明丹參注射液可以促進格列喹酮 在糖尿病大鼠體內(nèi)的吸收。

４ 討論

格列喹酮與丹參注射液合用后能顯著增加格列 喹 酮 的ｃｍａｘ 、ＡＵＣ，顯 著 縮 短ｔｍａｘ ，顯 著 減 少Ｃｌ。丹參注射液可以顯著 增 加 格 列 喹 酮 在 糖 尿 病 大 鼠 體 內(nèi)的 Ｋａ和 Ｐａｐｐ。這可能是丹參中某些成分影響 格列喹酮的吸收、分 布、代 謝 和 排 泄 過 程。腸 道 外 排載體和血流速度 可 能 是 影 響 藥 物 口 服 吸 收 的 因 素。有研究 表 明，丹 參 酮 Ⅰ 為丹參的有效成分之 一，可 以 抑 制 以 地 高 辛 為 底 物 的 Ｐ－糖 蛋 白 （Ｐ－ ｇｌｙｏｃｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐ－ｇｐ）轉(zhuǎn)運。