護(hù)肝片具有抑制肝纖維化、保肝、降酶等作用，是目前國(guó)內(nèi)治療肝損傷、早期肝癌及化療藥物性肝損傷的常用中成藥。目前護(hù)肝片的質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)中僅以五味子醇甲作為指標(biāo)對(duì)成方質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，可能無(wú)法準(zhǔn)確評(píng)價(jià)護(hù)肝片質(zhì)量或消除為達(dá)到質(zhì) 量要求而僅添加單一成分的情況。

METTLER AE240（十萬(wàn)分之一）、SARTFORUIS AG BS（萬(wàn)分之一）電子分析天平（施耐德），HW.SY21-K 型電熱恒溫水浴鍋（北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司），KQ400KDE 型高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山舒美）。 　　Waters 1525 高效液相色譜儀（美國(guó) Waters 公司，包 括 Breeze2 HPLC 色譜工作站，Waters 2414 示差折光檢 測(cè)器，Waters 2707 自動(dòng)進(jìn)樣器，Waters 038040 柱溫箱）。

乙腈（HPLC 級(jí)，F(xiàn)isher 公司），水為純凈水（杭州 娃哈哈集團(tuán)有限公司），其他試劑均為分析純（北京化 工廠）；牡荊苷（批號(hào)：Y25A8H42502）、異牡荊苷（批 號(hào)：Y07J8H39516）對(duì)照品（上海源葉生物科技有限公 司，純度均大于 98%）。護(hù)肝片（糖衣片，片心重 0.35 g）為市售樣品，共收集了 16 個(gè)不同廠家 30 批樣品， S1-1 ～ S1-15 來(lái)自同一廠家，S2 ～ S16 分別來(lái)自其他 不同廠家。

色譜柱：Prevail C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流動(dòng)相：乙腈 - 水（20∶80）；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)： 337 nm，流速：1 mL·min － 1 ；進(jìn)樣體積：15 μL。理 論塔板數(shù)按牡荊苷和異牡荊苷計(jì)不低于 3000。對(duì)照品和樣品色譜圖見圖 1。

分別精密稱取牡荊苷和異牡荊苷對(duì)照品適量，置 10 mL 量瓶中，用70% 甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻， 即得單個(gè)對(duì)照品儲(chǔ)備液（牡荊苷和異牡荊苷質(zhì)量濃度 分別為 0.496 mg·mL－ 1 和 0.552 mg·mL－ 1 ）。 再 分 別精密吸取牡荊苷和異牡荊苷對(duì)照品儲(chǔ)備液各 2 mL 置 10 mL 量瓶中，加 70% 甲醇溶解并稀釋至刻度，搖 勻，即得混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（牡荊苷 99.2 μg·mL－ 1 ，異牡荊苷 110.4 μg·mL－ 1 ）。

2.3　供試品溶液的制備 　　

先取同一批護(hù)肝片 10 片，除去包衣，研成細(xì)粉； 再取護(hù)肝片粉末約 1.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶 中，精密加入 70% 甲醇 25 mL，密塞，稱重，置水浴 加熱回流 90 min，放冷，再稱定重量，用 70% 甲醇補(bǔ) 足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，牡荊苷和異牡荊苷是綠豆中兩種 含量較高的黃酮類成分，具有較好的抗氧化、抗肝毒、 抗菌、抗炎及心血管保護(hù)作用，是綠豆中的主要活性 成分。因此，本研究選擇牡荊苷和異牡荊苷作為測(cè)定 指標(biāo)對(duì)護(hù)肝片進(jìn)行含量測(cè)定。將牡荊苷和異牡荊苷對(duì)照品溶液分別進(jìn)行全波長(zhǎng) 掃描，兩者均在 337 nm 下有最大吸收，故選 337 nm 為牡荊苷和異牡荊苷含量的測(cè)定波長(zhǎng)。因黃酮類成分 在甲醇中溶解度較好，故選擇甲醇作為提取溶劑，對(duì) 比不同濃度的甲醇提取結(jié)果，最終選擇 70% 甲醇作為 最佳提取溶劑。此外，通過優(yōu)化回流時(shí)間并與超聲提 取結(jié)果進(jìn)行比較，最終確定 70% 甲醇回流 90 min 為提 取方法。在所確定的色譜條件下，對(duì)照品及樣品的色譜圖 中在保留時(shí)間約 3.8 min 處均出現(xiàn)一色譜峰，空白溶劑 也在此處出峰，故確定此峰為溶劑峰。



 

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