柴胡桂枝湯出自《傷寒論》,為張仲景創(chuàng)立的經(jīng)典 方劑,由小柴胡湯和桂枝湯加減而來,全方由柴胡、半 夏、人參、甘草、黃芩、生姜、大棗、桂枝、芍藥 9 味藥組成, 既能調(diào)理營衛(wèi)氣血,又能和解表里,疏肝利膽,達(dá)到扶正 祛邪之目的 ,用于太陽少陽合病引起的發(fā)熱惡寒、肢 體疼痛等癥。
島津公司 LC-IT-TOF-MS 液相色譜串聯(lián)離子阱 飛行時間質(zhì)譜儀,配置自動進(jìn)樣器、柱溫箱、UV 檢測 器;LC-MS solution 工 作 站;島 津 公 司 Inertsil ODSSP C18 色 譜 柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);Eppendorf 5424 R 小型冷凍高速離心機(jī)離心機(jī);0.22 μm 微孔濾 膜,津騰公司;天津市泰斯特儀器有限公司 98- Ⅰ-B 電子調(diào)溫電熱套;賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公 司 BSA224S-CW 電子天平;昆山市超聲儀器有限公 司 KQ3200E 型超聲波清洗器。
采用 Inertsil ODS-SP C18 色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以 0.1% 甲酸水溶液(A)-0.1% 甲酸甲醇 溶液(B)為流動相,梯度洗脫(0~3 min,30%B;3~18 min,30%B → 40%B;18~30 min,40%B → 50%B;30~57 min,50%B → 75%B;57~65 min,75%B → 85%B;65~70 min,85%B → 95%B;70~75 min,95%B;75~85 min, 95%B → 30%B),流速 0.6 mL·min-1,檢測波長 275 nm,柱溫 25 ℃,進(jìn)樣量 5 μL。采用電噴霧化離子源,離子源溫度為 120 ℃,毛 細(xì)管電壓 3 200 V,質(zhì)量掃描范圍 m/z 100~1 000,干燥 氣體積流量 10 L·min-1 ,干燥氣溫度 300 ℃。取 柴 胡 桂 枝 湯 藥 液,加 超 純 水 稀 釋 至 0.14 g·mL-1 ,渦旋 1 min,12 000 r·min-1 高速離心 10 min, 取其上清液過 0.22 μm 的微孔濾膜,即得供試品溶液。取各對照品適量,精密稱定,加甲醇配制成混合 對照品溶液(甘草苷 80 μg·mL-1 ,黃芩苷 85 μg·mL-1 , 漢黃芩素 90 μg·mL-1 ,人參皂苷 Re 180 μg·mL-1 ,姜黃 素 75 μg·mL-1 ,芍藥苷 165 μg·mL-1 ),過 0.22 μm 微孔 濾膜,冷藏備用。
本實(shí)驗(yàn)考察對比了不同的流動相系統(tǒng),包括乙 腈 - 水、0.1% 甲酸乙腈 -0.1% 甲酸 水溶液、甲醇 - 水、0.1% 甲酸甲醇 -0.1% 甲酸水溶液;結(jié)果表明, 以 0.1% 甲酸甲醇 -0.1% 甲酸水溶液體系為流動 相,采用梯度洗脫,能夠達(dá)到較好的洗脫效果,各色 譜峰的峰形和分離度相對較好,故選用 0.1% 甲酸甲醇 -0.1% 甲酸水溶液作為流動相系統(tǒng)。柱溫考 察 15、20、25、30、40 ℃,柱溫度降低分離度增加,但 保留時間也相應(yīng)延長,綜合考慮選擇 25 ℃作為分離 柱溫。流動相流速考察 0.4、0.6、0.8 mL·min-1。0.8 mL·min-1 色譜峰分離度降低,個別色譜峰發(fā)生合 并;0.4 mL·min-1 各色譜峰保留時間增加,故選擇 0.6 mL·min-1,分離度好,保留時間適中。