龍利葉來源于大戟科守宮木屬植物龍 利 葉 ，收錄于《中國藥典》２０１５版一部，其性平、味甘、歸肺、胃經(jīng)，具有清熱潤肺、化痰止咳、定 喘、通便之功效，主治肺熱咳嗽、痰火咳嗽、肺結(jié)核咳嗽、肺癆咯血、支氣管炎、支氣管哮喘、大便秘結(jié)等。亦 有文獻(xiàn)記載：以龍利葉豬肉湯食之，可治療痰火咳嗽?，F(xiàn)代藥理研究表明龍利葉的水提液具有抗炎、 鎮(zhèn)痛及止咳祛痰作用，其根和莖的水提取液具有抗炎和鎮(zhèn)痛作用。

目前對龍利葉質(zhì)量評價(jià)方面，主要是對其顯微鑒別、紫外光譜鑒別和化學(xué)成分方面，本課題組前期也 對龍利葉莖的指紋圖譜進(jìn)行了研究。為了科學(xué)評價(jià)龍利葉質(zhì)量，為龍利葉質(zhì)量控制方法提供科學(xué)的 依據(jù)，本文對不同產(chǎn)地的龍利葉葉的指紋圖譜進(jìn)行研究。

ＫＱ５００ＤＥ超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；ＳＨＢ－ＩＩＩ循環(huán)水式多樣真空泵（鄭州長城科工 貿(mào)有限公司）；ＵＰＣ－１１－１０Ｔ實(shí)驗(yàn)室超純水器（四川優(yōu)譜超純有限公司）；Ａｌｌｉａｎｃｅｅ２６９５高效液相色譜 儀，Ｗ２９９８ＰＤＡ 檢測器（美國 ＷＡＲＴＥＲＳ公司）；ＡＪ１５０電子分析天平（瑞士梅特勒公司）；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ色 譜柱 （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ，美國菲羅門）；ＷｏｎｄａＳｉｌＣ１８－ＷＲ 色譜柱 （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ，日 本島津）；ＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８色譜柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ，大連依利特）。

１０批不同產(chǎn)地的龍利葉（見表１）經(jīng)廣西一心藥業(yè)副主任藥師馬利飛鑒定為大戟科守宮木屬龍利葉 Ｓａｕｒｏｐｕｓｒｏｓｔｒａｔｕｓ Ｍｉｑ．（ＳａｕｒｏｐｕｓｓｐａｔｕｌｉｕｓＢｅｉｌｌｅ）的干燥葉。 山奈酚（對照品，中國食品藥品檢定研究院，純度９９％，批號：１１０８６１－２０１３１０）；冰醋酸（天津市光復(fù) 精細(xì)化工 研 究 所，色 譜 純，批 號：２０１４０６０５０１）；乙 腈（美 國 Ｆｉｓｈｅｒ公 司，色 譜 純，批 號：１２２６９７）；水（超 純 水）；其他試劑均為分析純。

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２ 實(shí)驗(yàn)方法

２．１ 對照品溶液的制備

稱取山奈酚對照品適量，精密稱定１２．０ｍｇ，置于２０ｍＬ 容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，即得 ０．６ｇ／Ｌ的山奈酚對照品溶液。

取龍利葉樣品適量，精密稱定２．０００ｇ，加入乙酸乙酯３０ｍＬ，超聲提?。叮埃恚椋?，濾過，水浴蒸干溶劑， 加入適量山奈酚，加入甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至５ｍＬ容量瓶，甲醇定容至刻度，過０．２２μｍ 微孔濾膜，即得供試 品溶液。

色譜柱：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ色譜柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流動(dòng)相：乙腈－０．１％冰醋酸（梯度洗脫，洗脫 程序見表２），流速１ｍＬ／ｍｉｎ；柱溫３０ ℃；測定波長３０５ｎｍ；進(jìn)樣量２０μＬ。

３ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

３．１ 精密度實(shí)驗(yàn)

取供試品溶液，按２．３節(jié)的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣６次，考察儀器精密度。結(jié)果表明，各共有峰相對保留 時(shí)間 ＲＳＤ為０．０２％～０．０３％，相對峰面積 ＲＳＤ 為０．２４％～０．８８％，均小于３％，表明儀器精密度良好，符 合指紋圖譜的檢測要求。

取供試品溶液，按２．３節(jié)的色譜條件，分別在０、２、４、６、８、１０、１２ｈ進(jìn)樣、檢測，結(jié)果表明各共有峰相對 保留時(shí)間 ＲＳＤ為０．０２％～０．０３％，相對峰面積 ＲＳＤ為０．２８％～０．７８％，均小于３％，表明供試液在１２ｈ內(nèi) 穩(wěn)定。

取同一批次龍利葉，按照２．２節(jié)供試品溶液的制備方法制備供試品溶液６份，按２．３節(jié)下色譜條件測 定，結(jié)果表明各共有峰的相對保留時(shí)間 ＲＳＤ為０．０２％～０．０３％，相對峰面積 ＲＳＤ為０．８８％～１．８１％，ＲＳＤ 均小于３％，表明重復(fù)性良好。

按照２．２節(jié)方法制備１０批廣西不同產(chǎn)地龍利葉的供試品溶液，按照《中藥注射劑指紋圖譜研究的技 術(shù)要求（暫行）》建立廣西不同產(chǎn)地龍利葉 ＨＰＬＣ指紋圖譜。通過記錄１２０ｍｉｎ圖譜，８０ｍｉｎ后無色譜峰 出現(xiàn)，從而確定指紋圖譜的采集時(shí)間為８０ｍｉｎ。取供試品溶液依次進(jìn)樣，記錄１０批廣西不同產(chǎn)地龍利葉 的 ＨＰＬＣ色譜圖。

《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求（暫行）》中規(guī)定，制定指紋圖譜必須設(shè)立參照物，應(yīng)根據(jù)供試品 中所含化學(xué)成分的性質(zhì)，選擇適宜的對照品作為參照物。由于在龍利葉的指紋圖譜中，共有峰均為未明確 的化學(xué)成分，山奈酚化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，且在廣西龍利葉的 ＨＰＬＣ指紋圖譜中穩(wěn)定，故選山奈酚作為內(nèi)標(biāo)物和 指紋圖譜的參照峰，標(biāo)記為Ｓ，按照２．３節(jié)下確定的色譜條件，測定山奈酚對照品溶液和不同產(chǎn)地龍利葉供 試液的 ＨＰＬＣ圖譜。

結(jié)果表明：不同產(chǎn)地龍利葉的指紋圖譜共標(biāo)定８個(gè)共有峰，８個(gè)共有 峰的相對保留時(shí)間的 ＲＳＤ均小于３％；１０個(gè)不同產(chǎn)地龍利葉指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度值均大于 ０．９，與對照指紋圖譜有良好的相似性，說明不同產(chǎn)地龍利葉的成分差異不大，各共有峰的峰面積相差較大 （ＲＳＤ大于３％），說明不同產(chǎn)地龍利葉的成分含量有較大差異，不同產(chǎn)地的龍利葉在質(zhì)量上有一定的差 異。由于地理環(huán)境、采收時(shí)間、氣候等因素對藥材的質(zhì)量都會(huì)產(chǎn)生影響，今后可采集更多產(chǎn)地的龍利葉進(jìn) 行實(shí)驗(yàn)研究，積累數(shù)據(jù)，為龍利葉的質(zhì)量評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。 由于中藥成分較為復(fù)雜，本研究通過梯度洗脫程序建立龍利葉的 ＨＰＬＣ指紋圖譜，從整體上表征了 龍利葉的化學(xué)成分特征，今后可進(jìn)一步結(jié)合藥效進(jìn)行譜效分析，建立龍利葉的質(zhì)量評價(jià)模式。