中藥山楂是薔薇科，屬植物山楂（Crataegus Pinnatifida Bge）的干燥果實(shí)，在國(guó)內(nèi)多省區(qū)廣泛分布。 研究發(fā)現(xiàn)，其具有助消化、降脂、抗氧化、抗心律失常、 抗炎和防治動(dòng)脈粥樣硬化、非酒精性脂肪肝等作用，山楂果肉中含有黃酮類、有機(jī)酸、三萜類等成分 ， 因其營(yíng)養(yǎng)及藥用價(jià)值高，在食品、保健食品和藥品等 領(lǐng)域應(yīng)用十分廣泛 ，常用的規(guī)格有凈品、炒品、焦品與炭品等。

研究表明，黃酮類化合物在對(duì)心血管的保護(hù)作用中 具有突出的生理活性和藥理作用 。異槲皮苷和金絲 桃苷存在于多種植物體內(nèi)，屬于黃酮醇苷類化合物， 具有抗氧化、抗炎等藥理作用，是山楂特征性成分。 《中華人民共和國(guó)藥典》2015 版認(rèn)為山楂以枸櫞酸 為含量測(cè)定指標(biāo)，專屬性不強(qiáng)，因此為了科學(xué)有效地 評(píng)價(jià)山楂質(zhì)量，有必要建立測(cè)定其特異性成分異槲皮 苷和金絲桃苷的方法。

多功能高速粉碎機(jī)（型號(hào)：BO100T，永康市鉑歐五金制品有限公司）；電子天平（型 號(hào)：AR224CN，奧豪斯儀器有限公司）；數(shù)控超聲清洗器（型號(hào)：KQ-500DE，昆山市超聲儀器有限公司）； 1260 高效液相色譜儀（Aglient/ 安捷倫）；一體化超純 水機(jī)（型號(hào)：MILLI-QDirect16，美國(guó) Millipore 公司）。 1.2 材料 山楂飲片（產(chǎn)品批號(hào)：1601202，產(chǎn)地：山 東）；新鮮山楂（超市購(gòu)買(mǎi)）；金絲桃苷（產(chǎn)品批號(hào)： B21194，上海源葉生物科技有限公司）；異槲皮苷（產(chǎn) 品批號(hào)：111809-201403，中國(guó)食品藥品檢定研究院）； 甲醇、甲酸、乙腈均為色譜純（默克化工技術(shù)有限公司）； 試驗(yàn)用水皆為實(shí)驗(yàn)室自制二次蒸餾水。

色譜柱：Ultimate@XB-C18（4.6× 250 nm，5 μm），流動(dòng)相洗脫條件，見(jiàn)表 1；流速： 1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量： 10 μL。

1.3.2 對(duì)照溶液的配制

精密稱取金絲桃苷、異槲 皮苷對(duì)照品 20 mg 于 50 mL 容量瓶中，加甲醇適量 超聲溶解后用甲醇定容，制得對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密 量取 1 mL 金絲桃苷和異槲皮苷對(duì)照品儲(chǔ)備液于 10 mL 容量瓶中，甲醇定容至刻度，即得對(duì)照品混合液溶液。 1.3.3 供試品溶液的配制 精密稱取山楂樣品粉末 1 g， 置于 25 mL 錐形瓶中，加 10 mL60% 乙醇，稱定重量， 超聲提取 2 次，30 min/ 次，合并提取液，提取溫度為 60℃，功率 80%，冷卻，再稱定重量，用 60% 乙醇補(bǔ) 足減失重，搖勻后靜置片刻，取上清液，并以 0.45 μm濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液。

袁麗春等 以 HPLC 法測(cè)定不同市售荷葉藥材中 金絲桃苷和異槲皮苷的含量，發(fā)現(xiàn)其含量變化較大 , 認(rèn)為應(yīng)納入荷葉藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)以更全面反映荷 葉藥材質(zhì)量。在測(cè)定羅布麻葉中蘆丁、金 絲桃苷、異槲皮苷含量時(shí)，發(fā)現(xiàn)溫度對(duì)金絲桃苷和異 槲皮苷的色譜峰分離有明顯改善作用。林忠寧等 的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)金絲桃苷和異槲皮苷均屬黃酮類，分子結(jié) 構(gòu)相似，存在酚羥基而呈弱酸性，在流動(dòng)相中加入適 量酸可以抑制解離，改善色譜峰拖尾現(xiàn)象，縮短分析 時(shí)間。山楂是減肥降脂類保健食品的常用原料，但《中 華人民共和國(guó)藥典》2015 版“山楂”項(xiàng)下所收錄的 含量測(cè)定僅以枸櫞酸計(jì)，不能全面反映山楂成分與含 量。本試驗(yàn)考察了流動(dòng)相比例、檢測(cè)波長(zhǎng)等條件，首 次建立了 HPLC 同時(shí)測(cè)定山楂中金絲桃苷和異槲皮苷 含量的方法。 2.1 提取方法的考察 本試驗(yàn)考察了回流提取和超聲 提取兩種方法提取山楂中異槲皮苷和金絲桃苷。

兩法提取的異槲皮苷和金絲 桃苷含量相近，兩法提取的金絲桃苷成分含量相近， 但回流提取法對(duì)異槲皮苷的提取效率較低且雜峰多， 而超聲提取法對(duì)兩種成分的提取效率高且方便易行， 故本試驗(yàn)選用超聲提取法。

本試驗(yàn)比較了不同濃度的甲醇 （20%、40%、60%、80%）和不同濃度的乙醇（10%、 20%、40%、60%、80%）進(jìn)行超聲提取，發(fā)現(xiàn)乙醇提 取的異槲皮苷和金絲桃苷含量遠(yuǎn)高于甲醇提取的含量。 且在40%～60%范圍內(nèi)，當(dāng)乙醇濃度越高，提取率越大， 因此選擇 60% 的乙醇作為異槲皮苷和金絲桃苷的提取 溶劑。

提取溫度是影響提取效率的重 要因素之一，本研究考察了30 ℃、40 ℃、50 ℃和60 ℃。 結(jié)果表明，在 60 ℃時(shí)提取的異槲皮苷和金絲桃苷的色 譜峰面積最大，且在此溫度時(shí)出峰情況良好，因此選 用 60 ℃為此次試驗(yàn)的提取溫度。

采用超聲提取的方法提取山 楂中黃酮類成分，超聲波處理時(shí)間由 10 min 延長(zhǎng)到 30 min 時(shí)金絲桃苷和異槲皮苷提取率迅速升高，再 延長(zhǎng)則提取率下降。為提高黃酮類成分的提取率， 將供試品超聲提取2次，30 min/次，合并2次提取液， 發(fā)現(xiàn)較超聲提取 1 次的效率更高，但是超聲 3 次合并提取液的提取效率較超聲 1 次和 2 次提取的效率 都差，所以本次試驗(yàn)采用將供試品超聲提取 2 次， 30 min/ 次的提取方法。

分別精密吸取 對(duì)照品溶液、供試品溶液 10 μL 注入高效液相色譜儀， 記錄色譜圖。對(duì)照品混合溶液測(cè)定結(jié)果。精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液 1 mL 于 10 mL 量瓶中，甲醇定容，依次對(duì)半稀釋的 9 組不同 濃度的對(duì)照品混合液，編號(hào)為序號(hào) 1 ～ 9。進(jìn)樣量為 10 μL，按照 1.3.1 的液相色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以對(duì)照 品的濃度（C，μg/mL）為橫坐標(biāo)（X），液相色譜峰 的平均峰面積（A，mAU）為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn) 曲線，得到回歸方程和相關(guān)系數(shù)。取母液稀釋 10 倍混合對(duì)照品溶液（異 槲皮苷、金絲桃苷的濃度分別是 38.56、38.52 μg/mL） 10 μL，進(jìn)行測(cè)定。一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣 6 次，記錄峰面積。 結(jié)果異槲皮苷、金絲桃苷峰面積的 RSD 分別為 0.46%、 0.53%，表明儀器精密度良好。

本試驗(yàn)采用 HPLC 法同時(shí)測(cè)定山楂中異槲皮苷和 金絲桃苷，結(jié)果表明該方法的精密度、穩(wěn)定性和線性 關(guān)系均滿足分析檢測(cè)的要求。在同一色譜條件下，同 時(shí)測(cè)定異槲皮苷和金絲桃苷的含量，方法簡(jiǎn)單高效、 準(zhǔn)確穩(wěn)定，結(jié)果較為滿意。結(jié)果表明，市購(gòu)新鮮山楂 中異槲皮苷和金絲桃苷的含量較藥店購(gòu)買(mǎi)的山楂飲片 中異槲皮苷和金絲桃苷的含量較低，說(shuō)明產(chǎn)地不同等 因素影響了異槲皮苷和金絲桃苷的含量，具體原因?qū)?繼續(xù)深入研究。