蜂膠是蜜蜂在采集花粉的過程中，由植物幼 芽分泌物和樹脂，融合自身上顎腺分泌的唾液融 合而成的物質(zhì)。蜂膠在自然界中的產(chǎn)量非常有 限，但表現(xiàn)出來的生理效應(yīng)卻是異常獨(dú)特而強(qiáng)大， 故蜂膠有“紫色黃金”之稱; 蜂膠所含的化合物 包含黃酮類、酚酸類、酯類和氨基酸等，其中黃 酮類的含量非常高，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過一般的天然藥物，所 以蜂膠又有“黃酮化合物寶庫”的美稱; 蜂膠表現(xiàn)出多種多樣的生理活性，如抗炎、抗菌和降糖等，而這些作用與其所含有的黃酮有一定的關(guān) 系，故深入研究蜂膠總黃酮的穩(wěn)定性，對保護(hù)蜂膠 中的活性成分具有重要的意義。

1 材料和方法

1． 1 藥品與試劑

蘆丁 ( 上海融合醫(yī)藥科技有限公司，批號 170523，含量 ＞ 98% ) 、蜂膠( 湖北省咸寧市咸安區(qū) 世佳蜜蜂養(yǎng)殖專業(yè)合作社) 、無水乙醇、75% 的乙 醇、乙酸鉀、硝酸鋁、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯 甲酸鈉、蔗糖等，試劑均為分析純。

1． 2 儀器與設(shè)備

AL104 電子天平( 瑞士梅特勒托利多) 、FW 177 中草藥粉碎機(jī)( 上海哈瑞斯) 、昆山舒美KQ-500DB 型數(shù) 控超聲清洗機(jī)( 昆山市超聲儀器有限公司) 、AFC2000-G 實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)( 武漢品冠儀器公司) 、 G6860A 紫外可見分光光度計(jì)( Agilent Technologies) 、Z32HKC 離心機(jī)( HEＲMLE Labortechnik) 。

1． 3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取蘆丁 10． 00mg 于 50mL 容量瓶，用 無水乙醇溶解，得蘆丁儲備液( 200mg /L) 。然后 分別稀釋不同倍數(shù)，配制濃度為 4、8、12、16、20、 24、28、32、36mg /L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液( 含醋酸鉀和硝酸 鋁溶液) 。通過紫外分光光度計(jì)( 415nm) 測定上 述不同濃度蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度; 以蘆丁的濃 度( C) 為橫坐標(biāo)，以吸光度( A) 為縱坐標(biāo)，計(jì)算得 出相應(yīng)的回歸方程。

1． 4 蜂膠的前處理

將蜂膠原膠在 － 18℃ 冷凍 4h，取出后迅速粉 碎，過 60 目篩，留蜂膠粉備用。

1． 5 蜂膠總黃酮的提取和含量測定

精密稱取 0． 5g 蜂膠粉，置于 15mL 的 EP 管 中，加 75% 乙醇溶解，靜置 12h; 再將 EP 管放入超 聲清 洗 機(jī) 中，設(shè) 置 功 率 為 70kHz、超 聲 溫 度 為 30℃，時(shí)間為 20min，進(jìn)行超聲提取。 將 EP 管置于高速離心機(jī)中，設(shè)置轉(zhuǎn)速為 3600r/min，時(shí)間為 5min，離心后將上清液取至 50mL 的容量瓶中，加入 75% 的乙醇定容，得蜂膠 總黃酮供試液。取適量蜂膠總黃酮供試液，加入乙酸鉀和硝 酸鋁溶液，以空白管調(diào)零，于 415nm 處用紫外分光 光度計(jì)測定蜂膠總黃酮的吸光度。

1． 6 方法學(xué)考察

1． 6． 1 精密度試驗(yàn)

取同一蘆丁儲備液，分別制成 6 份對照品溶 液，在 1． 5 項(xiàng)下測定每份對照品溶液的吸光度值。

1． 6． 2 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一蜂膠粉末，精密稱取 0． 5g，共 5 份，按 照 1． 5 項(xiàng)下提取和測定蜂膠總黃酮。

1． 6． 3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份樣品的蜂膠總黃酮的供試液，分別 于 0、2、4、8、12、24h，在 1． 5 項(xiàng)條件下測定并記錄 吸光度值。

1． 6． 4 加樣回收率試驗(yàn)

分別取 1、2、3、4、5、6mL 蘆丁儲備液加入 0. 5mL 蜂膠總黃酮供試液中，在 1． 5 項(xiàng)條件下測 定并記錄吸光度值，計(jì)算回收率。

1． 7 食品添加劑對蜂膠總黃酮穩(wěn)定性的影響

分別加入檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯甲酸 鈉、蔗糖( 檸檬酸、蘋果酸和抗壞血酸的濃度分別 為 0. 00、0． 01% 、0． 02% 、0． 04% 、0． 06% 、0． 08% 、 0. 10% 、0． 12% ，苯甲酸鈉和蔗糖的濃度分別為 0. 00、0. 2% 、0． 4% 、0． 6% 、0． 8% 、1． 0% 、1． 2% ) 至蜂膠總黃酮供試液中，在 1． 5 項(xiàng)條件下分別于 6、12、24h 測定蜂膠總黃酮的吸光度。

2 結(jié) 果

2． 1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性關(guān)系考察

如圖 1 所示，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 y = 0． 1315x － 0． 0092，r = 0． 9998，蘆丁濃度在 4 ～ 36mg /L 范圍 內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2． 2 方法學(xué)考察

精密度試驗(yàn):6 份對照品溶液 ＲSD 值均小于3%。 重復(fù)性試驗(yàn): 結(jié)果顯示每個(gè)樣品的蜂膠總黃 酮含量的 ＲSD 值均小于 3% 。 穩(wěn)定性試驗(yàn): 結(jié)果顯示蜂膠總黃酮的吸光度 的 ＲSD 值均小于 3% 。 回收率試驗(yàn): 各組分的回收率在 99． 81% ～ 103． 87% ，ＲSD 值均小于 3% 。

2． 3 檸檬酸對蜂膠總黃酮的影響

檸檬酸對蜂膠總黃酮吸 光度的影響，因其濃度不同而影響的程度有較大 的差異，濃度小于 0． 08% 的范圍以內(nèi)，蜂膠總黃酮 的吸光度有所增加，而當(dāng)濃度大于 0． 08% ，蜂膠總 黃酮的吸光度有所降低。

2． 4 蘋果酸對蜂膠總黃酮的影響

蘋果酸濃度在 0． 01% 時(shí)， 6h 內(nèi)蜂膠總黃酮的吸光度明顯上升，12 h 內(nèi)趨于 平穩(wěn)，24 h 后 吸 光 度 明 顯 下 降; 當(dāng) 濃 度 大 于 0. 04% 時(shí)，吸光度值均下降，同時(shí)可以看出下降的 幅度隨著時(shí)間的延長而增大。

2． 5 抗壞血酸對蜂膠總黃酮的影響

抗壞血酸的濃度在小于 0． 02%時(shí)，蜂膠總黃酮 的吸光度呈下降的趨勢; 當(dāng)濃度在 0． 02% ～ 0. 08% 的范圍內(nèi)，蜂膠總黃酮的吸光度隨著抗壞血酸濃度 的增大而增加; 而當(dāng)濃度在 0． 08% ～ 0． 12% 范圍 內(nèi)，蜂膠總黃酮的吸光度保持穩(wěn)定。

2． 6 苯甲酸鈉對蜂膠總黃酮的影響

將一定濃度的苯甲酸鈉與蜂膠總黃酮混合， 待加入顯色劑后，溶液產(chǎn)生黃色的絮狀物，搖蕩后 仍呈渾濁狀，無法測定其吸光度。 2． 7 蔗糖對蜂膠總黃酮的影響 如圖 5( 封三) 所示，蔗糖在允許濃度范圍之 內(nèi)( 0． 00% ～ 1． 20% ) ，對蜂膠總黃酮的影響較小。

3 討 論

檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸和苯甲酸鈉對蜂膠 總黃酮的穩(wěn)定性都有影響，其影響程度與濃度和 作用時(shí)間有關(guān)。 不同濃度的檸檬酸對蜂膠總黃酮都有一定的 影響，可能是檸檬酸可促進(jìn) Al 3 + 與黃酮類化合物 相結(jié)合。 當(dāng)抗壞血酸濃度小于 0． 08% 時(shí)，蜂膠總黃酮 的吸光度會受到一定的影響。而當(dāng)抗壞血酸濃度在 0． 08% ～ 0． 12% 范圍內(nèi)，蜂膠總黃酮的吸光度 保持穩(wěn)定，表明此濃度范圍的抗壞血酸對蜂膠總 黃酮無明顯影響。因此，此濃度范圍的抗壞血酸 可作為蜂膠制品的添加劑。 蘋果酸的加入，對蜂膠總黃酮的吸光度有較 大影響。同時(shí)隨著蘋果酸濃度和作用時(shí)間的增 加，蜂膠總黃酮越不穩(wěn)定。表明蘋果酸不宜作為 蜂膠產(chǎn)品的添加劑。此外，苯甲酸鈉與黃酮類化 合物結(jié)合會產(chǎn)生淡黃色的絮狀物，同樣表明苯甲 酸鈉不宜作為蜂膠產(chǎn)品的添加劑。 允許濃度范圍之內(nèi)( 0． 00% ～ 1． 20% ) 的蔗糖 對蜂膠總黃酮無明顯影響，表明蔗糖可作為蜂膠 產(chǎn)品的添加劑。 近些年隨著蜂膠在日用品和保健品市場的應(yīng) 用越來越廣泛，其主要成分( 蜂膠總黃酮) 的含量 和穩(wěn)定性直接關(guān)系到產(chǎn)品的質(zhì)量。在國家允 許的食品添加劑使用的濃度范圍內(nèi)，通過實(shí)驗(yàn)，分析各添加劑對蜂膠總黃酮穩(wěn)定性的影響，為食品 添加劑在蜂膠產(chǎn)品的應(yīng)用中提供科學(xué)依據(jù)，也為 蜂膠制品的安全使用提供保障。



 

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