巴戟天 How 為茜草科植物，其根 入藥，具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效，用于陽痿遺 精，宮冷不孕，月經(jīng)不調(diào)，少腹冷痛，風(fēng)濕痹痛，筋骨痿軟。巴戟天主要成分包括蒽醌類、環(huán)烯醚萜苷類、糖類、氨基酸等。其中糖類成分一直是人類研 究的重點(diǎn)，但近些年來巴戟天所含的環(huán)烯醚萜類成分 也引起了研究者的關(guān)注?，F(xiàn)代藥理研究表明，巴戟天 屬植物中環(huán)烯醚萜具有抗菌、抗氧化、抗腫瘤、抗炎及 鎮(zhèn)痛等廣泛的藥理作用，為對(duì)該類成分開發(fā)進(jìn)行深入 研究奠定了基礎(chǔ)。巴戟天中單一環(huán)烯醚萜成分測(cè)定已 有較多研究，但總環(huán)烯醚萜類成分含量測(cè)定未見報(bào)導(dǎo)。

1 材料

1.1 儀器

UV- 1800紫外分光光度計(jì)（日本島津儀器有限公 司）；昆山舒美KQ-500DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀 器有限公司）；水浴鍋（國(guó)華電器有限公司）；BSA224SCW萬分之一電子天平（塞多利斯科學(xué)儀器（北京）有限 公司）；BT25S 十萬分之一電子天平（塞多利斯科學(xué)儀 器（北京）有限公司）；Milli-Q超純水系統(tǒng)（美國(guó)Millipore 公司）。

1.2 試藥

巴戟天（藥材為實(shí)驗(yàn)室成員親自赴各地采集，其產(chǎn) 地或來源見表1），經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥資源 與中藥化學(xué)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室葉曉川研究員鑒定為茜 草科植物巴戟天 How的肉質(zhì)根。甘 草（湖北天濟(jì)中藥飲片有限公司，批號(hào)：201608004）； 水晶蘭苷（成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司，批號(hào)： 151209，純度>98%）；食鹽（湖北鹽業(yè)集團(tuán)有限公司專 營(yíng)）；黃酒（浙江越景紹興酒有限公司）；水為蒸餾水， 其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公 司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 巴戟天炮制品的制備

取編號(hào) Y1（凈巴戟天）炮制，制備巴戟肉、鹽巴戟、 酒巴戟、制巴戟，一式三份。 巴戟肉：取凈巴戟天100g，照蒸法（《中國(guó)藥典》 2015版通則0213)，加水30mL 拌勻，潤(rùn)30min，蒸30min， 趁熱去木心，得到巴戟肉及其木心，干燥。 鹽巴戟：取凈巴戟天100g，照鹽蒸法（《中國(guó)藥典》 2015版通則0213)，2%食鹽水加入拌勻，潤(rùn)90min，蒸15 min，趁熱去木心，干燥。 酒巴戟：取凈巴戟天100g，加10mL 黃酒拌勻，潤(rùn) 60min，蒸30min，趁熱去木心，干燥。 制巴戟：取甘草6g 加水50mL 微沸90min，過濾后 藥渣加水50mL 微沸90min，合并濾液調(diào)為甘草汁100 mL。取凈巴戟天100g，照煮法《( 中國(guó)藥典》2015版通則 0213)，加100mL 甘草汁拌勻，潤(rùn)10min，煮至汁收盡，趁 熱去木心，干燥。 另取凈巴戟天直接剝?nèi)〉玫絻舭完饧皟舭完拘?。以上所有樣?0℃干燥后粉碎，過40目篩，備用。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取水晶蘭苷對(duì)照品適量，精密稱定，加70%乙醇配 制成濃度為0.65mg/mL 的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取巴戟天粉末約0.05g，精密稱定，置于100mL錐形 瓶中，加入70%乙醇25mL，稱重，浸泡30min，超聲處理 60min，搖勻，濾過，即得供試品溶液。

2.4 顯色條件

取供試液0.5mL于10mL試管，加70%的乙醇溶液至 1mL，加1mol/LHCl 溶液2mL，90℃水浴15min，冷卻至 室溫，加0.1%2，4-二硝基苯肼乙醇溶液0.5mL，搖勻， 90℃水浴25min，冷卻至室溫，加1mol/LNaOH溶液3mL， 室溫放置1h，以70%的乙醇溶液為空白對(duì)照。

2.5 最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定

精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1mL，按上述 顯色條件顯色，在400～800nm 范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果 表明，對(duì)照品和供試品在455～460nm處都有最大吸收， 本實(shí)驗(yàn)最大吸收波長(zhǎng)選為455nm。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密吸取水晶蘭苷對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5、0.6mL 置入10mL 試管，加70%乙醇至1mL，按上述 顯色條件進(jìn)行顯色，以70%乙醇反應(yīng)液為空白在455nm 處測(cè)定吸光度，吸光度值分別為0.179、0.342、0.476、 0.612、0.768、0.931。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)（X），吸光 度值 (A) 為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=14.783X+0.03393，R 2 =0.9987。結(jié)果表明水晶蘭苷在 0.01～0.06mg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 方法學(xué)考察

2.7.1 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，按顯色條件顯色， 顯色后 1h 連續(xù)測(cè)定 6 次吸光度，其吸光度值分別為 0.436、0.436、0.435、0.436、0.437、0.435，RSD= 0.178% ， 表明儀器精密度良好。

2.7.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，按顯色條件顯色， 在 15min、30min、45min、60min、90min、120min測(cè)定其吸 光度，其吸光度值分別為 0.437、0.436、0.435、0.434、 0.435、0.434，RSD=0.271%，表明在 2h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7.3 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取編號(hào)Y4 巴戟天粉末 6 份， 制成供試品溶液，按顯色條件進(jìn)行顯色，測(cè)定吸光度并 計(jì)算 含量，結(jié)果分 別為 21.96%、20.39%、22.17%、 21.21%、22.39%、22.46%，平均含量 21.76%，RSD = 3.72%，表明此法重復(fù)性良好。

2.7.4 加樣回收試驗(yàn)

精密稱取編號(hào) Y4 巴戟天粉末 9 份，每份 0.025g，分別精密加入水晶蘭苷對(duì)照品 6.6mg、 5.5mg、4.4mg，一式三份，制備供試品溶液，按顯色條件 進(jìn)行顯色，測(cè)定并計(jì)算回收率分別為 102.12%、98.07%、 96.38%，平均回收率為 98.85%，RSD=2.99%，表明此方 法準(zhǔn)確度高。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用超聲提取法制備供試品溶液，分別考察 了15min、30min、45min、60min、90min超聲提取。結(jié)果 表明超聲時(shí)間為60min 時(shí)供試品中總環(huán)烯醚萜含量最 高，故選取60min 為超聲時(shí)間。 巴戟天生長(zhǎng)在山坡上，廣東省的肇慶市、云浮市為 主產(chǎn)區(qū)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，同一市不同縣及同一縣不同 鄉(xiāng)鎮(zhèn)所產(chǎn)巴戟天總環(huán)烯醚萜存在差異，這可能與巴戟 天生長(zhǎng)的土質(zhì)、海拔高度、陽光照射時(shí)間等有關(guān)。檢測(cè)的23個(gè)樣品總環(huán)烯醚萜含量差異較大，但大部分在 20%~30%之間。福建省4個(gè)不同生長(zhǎng)年限樣品含量測(cè) 定結(jié)果顯示，巴戟天總環(huán)烯醚萜累積隨著年限增長(zhǎng)呈 先上升然后又下降的趨勢(shì)，但其動(dòng)態(tài)變化規(guī)律還需進(jìn) 一步深入研究。


 

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