酸棗仁是中醫(yī)常用的養(yǎng)心安神藥，從古代醫(yī)書 記載和臨床用藥來看對酸棗仁的用法有生用和炒熟 用的習(xí)慣，但歷代醫(yī)家對生、炒酸棗仁功效主治說 法各有不同。著名老中醫(yī)施今墨先生將生酸棗 仁與炒酸棗仁作為藥對，二者配伍使用，其認(rèn)為“熟 棗仁補(bǔ)肝寧心安神，生棗仁清肝寧心安神。二藥參 合，一補(bǔ)一清，清補(bǔ)合法，寧心安神的力量增強(qiáng)”。 三 重 復(fù) 合 實(shí) 驗(yàn) 裝 置（Triple-test）是 2008 年 Andre Ramos 等提出的一種用于評價嚙齒類實(shí)驗(yàn)動物 焦慮情緒和探索行為的復(fù)合實(shí)驗(yàn)裝置，其整合了目 前公認(rèn)的三種評價狀態(tài)焦慮動物模型的經(jīng)典方法 （OFT+EPM+LDB），可以區(qū)分測量不同抗焦慮藥物 對不同種屬小鼠焦慮情緒和探索行為的影響，其最 顯著的特點(diǎn)是避免了傳統(tǒng)方法因測量而帶來的實(shí)驗(yàn) 耐受性，同時利用動物模型的異質(zhì)性，既可以從不同 角度綜合評價狀態(tài)焦慮動物模型，又平均化了這種 因異質(zhì)性而帶來的誤差。

清潔級 ICR 小鼠，雄性，體質(zhì)量 18~20 g，購于遼 寧長生生物技術(shù)有限公司。許可證號：SCXK（遼） 2015-0001。

生與炒酸棗仁合煎液：以 1∶1 比例稱取生與 炒酸棗仁粗粉各 250 g，加入 8 倍量的蒸餾水，浸泡 30 min，然后用電磁爐加熱，130 ℃加熱至沸騰后再 100 ℃下煎煮 80 min。16 層紗布過濾藥液，濾液用 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至含生藥量 1 g/mL，放冰箱備用。 陽性對照藥：地西泮，2.5 mg/ 片，山東省平原制 藥廠，批號 100904。取兩片地西泮加蒸餾水超聲溶 解，定容到 100 mL 容量瓶中，即得 0.05 mg/mL 的混 懸液。

Mouse CORT ELISA Kit：R ＆ D Systems，Inc， Lot：E20161201A。

Triple-test 實(shí)驗(yàn)裝置，見圖 1。實(shí)驗(yàn)裝置由三個經(jīng)典的焦慮模型測試裝置 連接組成：分別是曠場試驗(yàn)（OF）、高架十字迷宮 （EPM）和明暗穿梭箱（LDB）。動物行為視頻分析系統(tǒng)：北京天鳴宏遠(yuǎn)科技發(fā) 展有限公司，V3.20 版；分析天平：美國梅特勒 - 托 力多儀器上海有限公司，型號：MS204S；超聲波清洗儀：型號：KQ-300DB，昆山市超聲儀器有限公司； 恒溫水浴鍋：金壇華龍實(shí)驗(yàn)儀器廠，型號：HH-S8； 多 功 能 酶 標(biāo) 儀：美 國 伯 騰 儀 器 有 限 公 司，型 號： SynergyMx；高速低溫冷凍離心機(jī)：美國 TOMOS 有限 公司，型號：3-18R（3006004）

1.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制條件

1.2.1 飼養(yǎng)環(huán)境

飼養(yǎng)環(huán)境為通風(fēng)、避光、隔音、屏蔽狀態(tài)，采用 自動定時光控系統(tǒng)對小鼠的生活環(huán)境實(shí)行明暗光照 周期處理（12/12 h 明暗交替，早上 7：00 熄燈，晚上 19：00 開始照明，即晝夜顛倒）。室溫：（24±1）℃。 小鼠每 4 只一籠（30 cm×19 cm×13 cm），并在籠內(nèi) 放置一 PVC 管（內(nèi)徑直徑 4 cm，長 7.5 cm）構(gòu)成豐富 環(huán)境，所有動物自由獲得食物和水。

同上。實(shí)驗(yàn)期間，所有光照均來自 Triple-test 實(shí) 驗(yàn)裝置的光源，使明區(qū)的光照強(qiáng)度為 640~1300 lux， 暗區(qū)的光照強(qiáng)度為 7~13 lux，高架迷宮的光照強(qiáng)度 為 2~4 lux，曠場的光照強(qiáng)度為 14~20 lux，Triple-test 實(shí)驗(yàn)時間為 9：00-17：00。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白組比較，陽性組和生與 炒酸棗仁配伍組小鼠的曠場中央?yún)^(qū)運(yùn)動時間百分 比、中央?yún)^(qū)運(yùn)動距離和周邊區(qū)運(yùn)動距離都沒有顯著 性變化（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組比較，陽性組和生與 炒酸棗仁配伍組小鼠進(jìn)入高架十字迷宮開臂次數(shù)百 分比和在高架十字迷宮開臂停留時間百分比都有顯 著增加（P<0.01），陽性組小鼠進(jìn)入高架十字迷宮閉 臂次數(shù)顯著增加（P<0.01），生與炒酸棗仁配伍組無 顯著變化（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組比較，陽性組和生與 炒酸棗仁配伍組小鼠在明暗穿梭箱明區(qū)運(yùn)動時間百 分比顯著性增加（P<0.05）、在明暗穿梭箱穿梭次數(shù) 有極顯著性增加（P<0.01）。陽性組小鼠在明箱中運(yùn) 動距離有顯著性增加（P<0.05），生與炒酸棗仁配伍 組小鼠有極顯著性增加（P<0.01）。陽性組和生與炒 酸棗仁配伍組小鼠在暗箱中運(yùn)動距離與空白組比較 無顯著性變化（P>0.05）。

曠場實(shí)驗(yàn)（OFT）、高架十字迷宮（EPM）和明 暗穿梭箱（LDB）是三種公認(rèn)的用于評價和建立狀 態(tài)焦慮動物模型的經(jīng)典方法，三種方法單獨(dú)使用 不能全面的反映實(shí)驗(yàn)動物的焦慮狀態(tài)，但如果對 同一實(shí)驗(yàn)動物連續(xù)應(yīng)用三種方法會因測量的重復(fù) 性而帶來實(shí)驗(yàn)?zāi)褪苄?。本研究采?Andre Ramos于 2008 年提出的復(fù)合實(shí)驗(yàn)裝置，其整合了目前 公認(rèn)的三種建立狀態(tài)焦慮動物模型的經(jīng)典方法 （OFT+EPM+LDB），其原理是利用嚙齒動物天性厭 惡明亮開闊的地區(qū)，但他們同時還有探索新鮮事 物（包括威脅和刺激）的特性，這種探索本性和外 界環(huán)境的矛盾沖突就造成了嚙齒類動物在實(shí)驗(yàn)中 的焦慮情緒。