溪黃草為唇形科香茶菜屬線紋香茶菜 Isodon striatus (Benth.) Kudo 或溪黃草 I. sorra (Maxim.) Kudo 的干燥地上部分，《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》《廣東中 藥材標(biāo)準(zhǔn)》均有收載。溪黃草具有清熱、利濕、退 黃的功效，用于濕熱黃疸、濕熱瀉痢、急性黃疸型 肝炎、急性膽囊炎而有黃疸者。溪黃草在廣東各 地臨床應(yīng)用較為普遍，并開發(fā)出多種中成藥或保健 品，如溪黃草沖劑、溪黃草茶和溪黃八珍茶等。溪 黃草中主要含有酚酸類、黃酮類、香豆素、揮發(fā)油 等成分。藥理學(xué)實驗表明，溪黃草的水提物具有 抗炎、保肝作用，其中抗炎、抗病毒作用的主要 成分為酚酸類化合物。因此，酚酸類成分對溪黃 草的質(zhì)量控制具有一定的意義。目前，《中國藥典》 還未曾收錄溪黃草中多種酚酸類成分的檢測標(biāo)準(zhǔn)， 且相關(guān)研究較少。本研究建立了同時測定溪黃草 中有機酸的方法，采用主成分分析將不同產(chǎn)地的溪 黃草進(jìn)行區(qū)別歸屬，分析出哪些主要成分可用于質(zhì) 量控制，為溪黃草的質(zhì)量控制和臨床用藥選擇提供 依據(jù)。

Agilent LC-1260 型高效液相色譜儀系列；萬分 之一 BS224S 型電子天平（Sartorius）；十萬分之一 AUW220D 型電子天平（日本島津公司）；KQ-250DB 型數(shù)控超聲波清洗器由鞏義市予華儀器有限責(zé)任公 司生產(chǎn)；KQ5200 型水浴鍋由昆山市超聲儀器有限 公司生產(chǎn)。 綠原酸（批號 110753-201415）、隱綠原酸（批 號 110753-201314）、咖啡酸（批號 110885-200102）、 迷迭香酸（批號 111871-201404）對照品均由中國 食品藥品檢定研究院提供。甲醇為色譜純（Merck）， 水為超純水，其余試劑均為分析純。 溪黃草藥材共 20 批，分別購于廣東、福建，經(jīng) 江西中醫(yī)藥大學(xué)龔建平教授鑒定為溪黃草 Isodon sorra (Maxim.) Kudo 的干燥地上部分。

Cosmosil 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）； 流動相：甲醇–0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脫（0～ 28 min，12%～26%甲醇；28～38 min，26%～42% 甲醇；38～55 min，42%甲醇）；體積流量為 1.0 mL/min；柱溫為 30 ℃；檢測波長為 330 nm；進(jìn)樣 量 10 μL。色譜圖的各峰與相鄰峰的分離良好，見 圖 1。

2.2 混合對照品溶液的制備

精密稱取綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸和迷迭香 酸對照品適量，加入 70%乙醇配成單一對照品儲備 液，再分別取各儲備液，制成含上述 4 個成分分別 為 14、26、12、240 μg/mL 的混合溶液，即得。

取溪黃草藥材粉末（過 4 號篩）約 0.5 g，精密 稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 70%乙醇 25 mL， 稱定質(zhì)量，回流提取 30 min 后，再次稱定質(zhì)量，用 70%乙醇補足減失質(zhì)量，濾過，濾液經(jīng) 0.22 μm 微 孔濾膜濾過，即得。

精密吸取混合對照品溶液 1、3、6、10、15、 20 μL，按上述色譜條件分別進(jìn)樣，以峰面積為縱坐 標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。 綠原酸：Y＝6 626.752 2 X－0.421 6（r＝0.999 8）； 隱綠原酸：Y＝2 852.045 2 X－0.4256（r＝0.999 8）； 咖啡酸：Y＝6 971.958 9 X－0.321（r＝0.999 9）；迷 迭香酸：Y＝1 772.000 6 X＋3.896 9（r＝0.999 7）。 綠原酸在 0.014～0.280 μg、隱綠原酸在 0.026～ 0.520 μg、咖啡酸在 0.012～0.240 μg、迷迭香酸在 0.24～4.80 μg 與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

取混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，測定峰面 積，結(jié)果綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸和迷迭香酸峰 面積的 RSD 值分別為 0.53%、0.45%、0.44%、1.32%。

取批次 S8 的溪黃草樣品，制備供試品溶液，室溫放置，分別于 0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)行測定， 結(jié)果綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸和迷迭香酸峰面積 的 RSD 值分別為 0.87%、1.26%、1.43%、0.53%。 結(jié)果表明供試品溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

取批次 S8 溪黃草樣品 6 份，制備供試品溶液， 進(jìn)樣測定，結(jié)果綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸和迷迭 香酸平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為 0.418 2、0.061 3、0.345 1、 0.442 3 mg/g，RSD 值分別為 1.22%、2.32%、1.22%、 0.37%。

取批次 S8 的溪黃草樣品約 0.5 g，精密稱定 6 份，按 80%、100%、120%的量各加入綠原酸、隱 綠原酸、咖啡酸和迷迭香酸對照品，制備供試品溶 液，進(jìn)樣測定，計算加樣回收率，結(jié)果綠原酸、隱 綠原酸、咖啡酸和迷迭香酸平均回收率分別為 100.63%、99.08%、99.30%、101.23%，RSD 值分別為 0.92%、1.34%、2.05%、0.86%。

取 20 批溪黃草樣品各 3 份，制備供試品溶液， 采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸和 迷迭香酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，見表 1。

采集 20 批溪黃草中 4 個成分定量數(shù)據(jù)，運用 SIMCA 13.0 軟件進(jìn)行主成分分析，將不同產(chǎn)地的溪 黃草樣本分為 2 類，即 S1～S13、S14～S20，前者 來源廣東，后者來源福建，可直觀地發(fā)現(xiàn)不同地理 來源的溪黃草的差異。將所得主成分經(jīng)正交偏最小 二乘法（OPLS-DA）處理，得到更確切的結(jié)果。統(tǒng) 計結(jié)果對區(qū)分產(chǎn)地的差異性提供了依據(jù)，見圖 2。 將綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、迷迭香酸的質(zhì) 量分?jǐn)?shù)進(jìn)行聚類分析，用聚類熱圖顯示結(jié)果，見圖 3?？梢娍Х人帷⒚缘闼崾莾蓚€不同產(chǎn)地溪黃草構(gòu) 成差異的主要原因。

以甲醇作為流動相較乙腈的分析效果更佳，且 流動性中含有的少量醋酸可較好地改善峰形。結(jié)合 酚酸類化合物的結(jié)構(gòu)特征，最終選定 330 nm 為檢測波長較為合適。 成分測定結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的 20 批溪黃草樣 品中，4 個酚酸類成分含量有一定的差異，迷迭香 酸的平均含量較其他成分高，其次是咖啡酸。根據(jù) 主成分分析、聚類分析結(jié)果，所收集的廣東批次與 福建批次能較好區(qū)分，說明不同省份對溪黃草中酚 酸含量的影響較為顯著，尤其是咖啡酸和迷迭香酸， 可作為差異性的標(biāo)記成分。因此，在針對某一成分 起效時，可以選定特定產(chǎn)地的藥材入藥，如溪黃草 水提物中的咖啡酸具有抗肝炎作用，就可選用 該成分含量較高的福建產(chǎn)區(qū)的藥材。主要成分的差 異性，對產(chǎn)地的差異具有一定的影響，而藥效成分 是否與主要成分為同一物質(zhì)，則需要后期的藥效實 驗以驗證。