高脂血癥為臨床上的多發(fā)病及常見病，是引發(fā) 脂肪肝、心腦血管疾病的重要病因之一，中醫(yī) 藥在防治該疾病上具有獨特優(yōu)勢，可多靶點、多環(huán) 節(jié)綜合降脂，而且毒副作用小，相關(guān)中藥或保健食 品市場前景良好。

六味葛藍降脂片是由廣西中醫(yī)藥大學制藥廠擬 開發(fā)的具有輔助降血脂功效的保健食品，由絞股 藍、火麻仁、決明子、葛根、沙棘、荷葉 6 味藥食 兩用藥材配伍而成，通過扶正祛邪、補中益氣來調(diào) 節(jié)機體代謝機能，從而達到降血脂作用。方中 葛根和決明子發(fā)揮主要作用，前者所含異黃酮是重 要藥效物質(zhì)，葛根素、大豆苷、大豆苷元等具有擴張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量作 用，同時可降血脂; 后者具有降血脂、降血 壓等療效，可抑制血清膽固醇，以降血脂效果更顯 著，其主要有效成分為蒽醌，代表性成分 有橙黃決明素、大黃酚，為瀉下、降血脂作用的主 要成分。

本次分析建立六味葛藍降脂片 HPLC 指紋圖譜， 并測定其中葛根素、大豆苷、大豆苷元、橙黃決明 素、大黃酚的含有量，為完善該制劑質(zhì)量標準提供 依據(jù)。

Agilent 1260 高效液相色譜儀，配置 UV 型紫 外檢測器; TGL-16G 離心機 ( 上海安亭科學儀器 廠) ; KQ5200B 超聲清洗器 ( 昆山市超聲儀器有限 公司) ; SQP 電子天平 ［百萬分之一，賽多利斯科學儀器(北京)有限公司］; 超純水 ( 密思博超純水機制備) 。六味葛藍降脂片共 10 批 ( 批 號 20170501、20170601、20170602、20170603、20170701、 20170801、 20170802、 20170803、 20170901、 20171001) ，2 g /片，由廣西中醫(yī)藥大學制藥廠提 供，原藥材均購自廣西玉林市祥生中藥飲片有限責 任公司，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學制藥廠質(zhì)量保證部專家 鑒定為正品。葛根素對照品 ( 170109，含 有 量 ＞ 98%，上海融 禾 醫(yī) 藥 科 技 有 限 公 司) ; 大 豆 苷 ( MUST-17092780，含 有 量 99. 46%) 、大 豆 苷 元 ( MUST-17101202，含有量 99. 99%) 、橙黃決明素 ( 111900-201303， 含 有 量 99. 1%) 、 大 黃 酚( MUST-17041310，含 有 量 99. 50%) 對 照 品 ( 成 都曼思特生物科技有限公司) 。乙腈為色譜純 ( 美 國 Fisher 公司) ; 甲醇、磷酸為分析純 ( 國藥集團 化學試劑有限公司) ; 水為超純水。

Phenomenex Gemini C18 色 譜 柱 ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ; 流動相乙腈 ( A) - 0. 1%磷酸 ( B) ，梯度洗脫( 0 ～ 8 min，15%A; 8 ～ 20 min，30%A; 20 ～ 40 min，55%A; 40 ～ 45 min， 60%A; 45～55 min，70%A; 55 ～ 60 min，85%A) ; 體積流 量 1. 0 mL /min; 檢 測 波 長 280 nm; 柱 溫 30 ℃ ; 進樣量 10 μL。

精密稱取葛根素、大豆苷、 大豆苷元、橙黃決明素、大黃酚對照品適量，甲醇 分別制成 1. 210 0、0. 750 0、0. 635 0、0. 570 0、 0. 315 0 mg /mL，取適量置于同一量瓶中，甲醇稀 釋，即得 ( 質(zhì) 量 濃 度 分 別 為 0. 164 1、0. 067 3、 0. 034 4、0. 054 9、0. 028 9 mg /mL) ，置于冰箱中 貯存?zhèn)溆谩?/span>

取本品 20 片，研細，精密稱 取約 2 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入 20 mL 甲 醇，稱定質(zhì)量，超聲 ( 200 W、40 kHz) 30 min， 冷卻至室溫，甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過， 續(xù)濾液離心，取上清液，即得。

取供試品溶液( 批 號 20170501) ，在 “2. 1” 項色譜條件下進樣測定 6 次，以 7 號峰的保留時間和色譜峰面積為參照，測 得其 余 11 個共有峰的相對保留時間 ＲSD 在 0. 05% ～0. 24%之間，相對峰面積 ＲSD 在 0. 89% ～ 2. 0%之間，表明儀器精密度良好，符合相關(guān)要求 和規(guī)定。

取供試品溶液( 批 號 20170501) ，于 0、2、4、8、12、24 h 在 “2. 1” 項色譜條件下進樣測定，以 7 號峰保留時間和色譜 峰面積為參照，測得其余 11 個共有峰的相對保留 時間 ＲSD 在 0. 09% ～ 1. 1%之間，相對峰面積 ＲSD 在 0. 64% ～2. 0%之間，表明溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好，符合相關(guān)要求和規(guī)定。

取本品 ( 批號 20170501) 約 2 g，按 “2. 2. 2”項下方法制備 6 份供試品溶液， 在 “2. 1”項色譜條件下進樣測定，以 7 號峰保留 時間和色譜峰面積為參照，測得其余 11 個共有峰 的相對保留時間 ＲSD 在 0. 10% ～0. 34%之間，相對 峰面積 ＲSD 在 1. 2% ～1. 9%之間，表明該方法重復(fù) 性良好，符合相關(guān)要求和規(guī)定。

取 10 批樣品，按 “2. 2. 2”項 下方法制備供試品溶液，在 “2. 1”項色譜條件下 進樣測定，見圖 1，再通過 “中藥指紋圖譜相似度 評價軟件” ( 2012. 130723 版) 進行分析，平均數(shù) 法生成對照圖譜，多點校正法建立指紋圖譜，見圖 2。共標示出 12 個共有峰，由于 7 號峰 ( 大豆苷 元) 保留時間適中，穩(wěn)定性好，峰面積較大，故 選擇其作為參照峰 ( S) ; 10 批樣品相似度均大于 0. 997，表明其質(zhì)量相對穩(wěn)定，共有成分基本一致， 但含有量上有差異。

3 討論

本次考察供試品溶液制備方法時，以甲醇、 水、乙醇為提取溶劑，比較了超聲、回流提取，以 及提取時間、溶劑用量、提取次數(shù)對含有量測定的 影響，發(fā)現(xiàn)在取樣量 2 g、甲醇 20 mL、超聲30 min 條件下供試品溶液中 5 種成分總含有量較高，分離 度較好，而且操作簡便。然后，采用二極管陣列檢 測器分析不同波長下色譜圖，發(fā)現(xiàn)在280 nm處各成分較穩(wěn)定，含有量較高，并與其他雜質(zhì)峰達到良 好的分離效果。