科舒筋洗劑在本院沿用有近 20 年 , 是本院制劑中的 拳頭制劑。該制劑療效確切 , 廣泛用于臨床 , 使用量逐年增 長(zhǎng) , 得到臨床和患者高度的認(rèn)可 , 臨床主要用于跌打損傷、 勞損、腰頸椎病、骨關(guān)節(jié)炎以及骨折恢復(fù)期等的外洗、熏蒸 治療。其主要由兩面針、蘇木、黃柏、荊芥、 鉤藤、透骨 草、威靈仙、千年健、 北劉寄奴、寬筋藤 10 味中藥組成 , 具 有活血散瘀、舒筋通絡(luò)作用 , 常用來(lái)治療跌打損傷、瘀血等。 該制劑現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)蘇木、黃柏進(jìn)行定性鑒別, 對(duì)于其含 量檢測(cè)目前尚無(wú)標(biāo)準(zhǔn) , 導(dǎo)致無(wú)法全面有效地控制外科舒筋洗 劑的質(zhì)量。黃柏在外科舒筋洗劑處方中為臣藥 , 鹽酸小檗堿 為黃柏主要有效成分, 故本文擬探索采用高效液相色譜法 建立該制劑中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法 , 并測(cè)定外科舒筋 洗劑中鹽酸小檗堿的含量, 旨在為控制其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供 客觀定量的評(píng)價(jià)方法 , 提高該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) , 為日常生產(chǎn)提 供檢驗(yàn)依據(jù) , 現(xiàn)具體報(bào)告如下。

美國(guó)安捷倫公司 Agilent-1200 型高效液相色譜 儀 , 包括安捷倫四元泵 , 安捷倫在線脫氣機(jī) , 安捷倫紫外檢測(cè) 器等 ；安捷倫色譜柱 ( 型號(hào) ：Eclipse Plus 填料 ：C18) ；德國(guó)賽多利斯公司電子天平 , 昆山超聲儀器有限公司 KQ-250DA 型數(shù)控型超聲波清洗器 ( 功率 250 W, 頻率 40 kHz)。

乙腈 ( 色譜純 , TEDIA), 磷酸二氫鉀 ( 廣州化學(xué) 試劑廠 20170701-1), 水為超純水 ；鹽酸小檗堿對(duì)照品 ( 批號(hào)：110713-2011814 供含量測(cè)定用 ) 購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定 所 , 含量為 86.7%；外科舒筋洗劑 ( 河源市中醫(yī)院提供 3 批次： 批號(hào) ：181001、181002、181101)。

對(duì)照樣品溶液的配制 ：以電子分析天平稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品 10.02 mg 于 100 ml 量瓶中 , 然 后加甲醇溶液將其溶解并稀釋至刻度 , 作為貯備液 , 精密量 取貯備液 5 ml 于 25 ml 量瓶中 , 同樣以甲醇溶液稀釋至刻度 后即為對(duì)照樣品液 ；供試品溶液的配制 ：取外科舒筋洗劑溶液過(guò)濾后 , 精密量取 20 ml, 蒸干 , 加甲醇溶液使其溶解 ( 必 要時(shí)可用超聲方法溶解 ) 并轉(zhuǎn)移至 50 ml 量瓶中 , 加甲醇溶 液至刻度 , 即得供試品溶液 ；陰性對(duì)照品溶液液的配制 ：按 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的處方比例同法配制不含黃柏的陰性樣品 , 按供試品溶液配制方法配制成相應(yīng)的陰性對(duì)照品溶液。

以 Agilent Eclipse Plus C18 (250.0 mm×4.6 mm, 5 μm) 為填充柱 , 流動(dòng)相為乙腈 -0.03 mol/L 磷 酸 二 氫 鉀 溶 液 (28∶72), 檢測(cè)波長(zhǎng)為 347 nm, 流速為1.0 ml/min, 進(jìn)樣量為 10 μl ；以峰面積外標(biāo)法定量。在本色譜 條件下 , 外科舒筋洗劑中鹽酸小檗堿對(duì)照品的色譜峰與其他 組分峰均取得較好分離 , 干擾性較小。

分別取對(duì)照品溶液、樣品溶液、陰性 對(duì)照液 , 按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)繪高效液相色譜法圖譜 , 組 分的出峰時(shí)間區(qū)域相互分離 , 未發(fā)現(xiàn)明顯干擾峰 , 結(jié)果表明 處方中其他成分及輔料對(duì)鹽酸小檗堿的測(cè)定無(wú)干擾作用。見(jiàn) 圖 1。

2. 4 線性關(guān)系的考察　

分別精密量取鹽酸小檗堿對(duì)照品儲(chǔ)備液 1、3、5、7、9、11 ml, 置 于 25 ml 量 瓶 中 , 通 過(guò)甲醇定容至要求刻度 , 充分搖勻后得到一系列標(biāo)準(zhǔn)溶 液。 按 上 述 色 譜 條 件 分 別 進(jìn) 樣 10 μl, 測(cè) 定 峰 面 積 , 以 峰 面積 (A) 為縱坐標(biāo) , 鹽酸小檗堿對(duì)照品濃度 (C) 為橫坐標(biāo) 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 , 進(jìn)行線性回歸 , 計(jì)算得回歸方程。鹽酸小 檗 堿 A=29.63C+45.743(r=0.9912), 結(jié)果表明鹽酸小檗堿在 3.4749~38.2243 μg 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

外科舒筋洗劑為本院院內(nèi)制劑 , 具 有活血散瘀、舒筋通絡(luò)之功效 , 臨床用來(lái)治療跌打損傷、瘀 血等疾病 , 臨床應(yīng)用多年 , 效果顯著。外科舒筋洗劑原標(biāo)準(zhǔn) 僅對(duì)蘇木、黃柏進(jìn)行定性鑒別 , 不符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升要求 , 對(duì)其日常生產(chǎn)質(zhì)量也難于監(jiān)控。本試驗(yàn)曾經(jīng)嘗試對(duì)兩面針中 氯化兩面針堿進(jìn)行含量測(cè)定 , 但供試品峰面積偏小 , 考慮 現(xiàn)有工藝中該成分提取率不高, 故不再選擇兩面針作為研 究對(duì)象。黃柏在該制劑處方中為臣藥 , 其具有清熱、消腫、 止痛等作用 , 與兩面針等其他藥發(fā)揮活血散瘀、舒筋通絡(luò)止 痛之功效。黃柏主要以鹽酸小檗堿為主要有效成分。在 上述試驗(yàn)條件下 , 經(jīng)試驗(yàn)證實(shí) , 鹽酸鹽酸小檗堿試驗(yàn)分離度 和重復(fù)性較好 , 且陰性無(wú)干擾 , 故選擇其為研究對(duì)象。

經(jīng)在線全波長(zhǎng)紫外吸收光譜掃描分 析 , 鹽酸小檗堿在 265 nm 和 347 nm 波長(zhǎng)處有最大吸收波長(zhǎng)。 若采用 265 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí) , 鹽酸小檗堿的分離效果較差 , 分離度達(dá)不到要求；而采用 347 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí) , 鹽酸小檗堿的分離度好 , 峰形良好。且其他物質(zhì)對(duì)測(cè)定無(wú)干 擾。最終采用 347 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

提取方法可選取甲醇、甲醇 - 鹽酸 (100∶1) 兩種溶劑分別進(jìn)行提取 , 結(jié)果并無(wú)明顯差別 , 但從 操作方法的簡(jiǎn)便方面考慮 , 選取甲醇提取鹽酸小檗堿。

作者曾對(duì)不同流動(dòng)相體系條件的實(shí)驗(yàn) 效果分別進(jìn)行了考察 , 分別比較乙腈 -0.1% 磷酸溶液 ( 每 100 ml 加十二烷基磺酸鈉 0.1 g) 及乙腈 -0.03 mol/L 磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相的效果 , 結(jié)果表明 , 兩者結(jié)果并無(wú)明顯 差別 , 從操作方法的簡(jiǎn)便及環(huán)境保護(hù)方面考慮 , 選取乙腈 -0.03 mol/L 磷酸二氫鉀溶液作為流動(dòng)相。

通過(guò)對(duì)不同時(shí)間生產(chǎn) 3 批 外科舒筋洗劑進(jìn)行鹽酸小檗堿含量的測(cè)定 , 結(jié)果顯示差異 小 , 說(shuō)明該制劑生產(chǎn)工藝穩(wěn)定 , 在制訂內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)或者提高 該制劑標(biāo)準(zhǔn) , 可暫定外科舒筋洗劑的黃柏以鹽酸小檗堿計(jì) , ≥30 μg /ml。

綜上所述 , 本研究建立測(cè)定外科舒筋洗劑中鹽酸小檗堿 含量方法 , 經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證 , 所建立的測(cè)定方法符合定量分 析要求 , 最終確定以 347 nm 為檢測(cè)波長(zhǎng) , 甲醇為提取液 , 乙 腈 -0.03 mol/L 磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相 , 測(cè)定結(jié)果顯示該法 簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速、分離度好 , 重復(fù)性好 , 干擾小 , 可用于 外科舒筋洗劑的質(zhì)量控制。