新疆黑果小檗( Berberis heteropoda Schrenk) 為小 檗科( Berberidaceae) 小檗屬( Berberis L. ) 植物，黑果 小檗根為黑果小檗的干燥根。別名: 刺黃柏。維名: “Zirlek yiltizi”，即“茲力克伊力提子”。根據(jù)《新疆 植物志》( 1999 年版) 記載，黑果小檗因其果實(shí)成熟 時(shí)呈紫黑色而得名。分布于新疆各地，國外蒙古及哈 薩克斯坦也有分布。

1 材料與試藥

分析天平( MettLer － TeLedo) 、超聲波清洗儀( KQ-500DE，昆山舒美超聲儀器有限公司) 、水浴鍋、冷凝 管、鐵架臺(tái)、鐵夾、量筒、250 mL 圓底燒瓶、蒸發(fā)皿、吸 量管、洗耳球、100 μL 微量進(jìn)樣針、半自動(dòng)點(diǎn)樣儀( CAMAG LINOMAT 5) 、薄層色譜數(shù)碼呈像系統(tǒng)( CAMAG ＲEPＲOSTAＲ 3) 、雙槽展開缸( 20 cm × 10 cm) 、硅膠 G 板、硅膠 GF254 板、H 薄層板、烘箱、0. 22 μm 濾膜。 新疆黑果小檗根于 2017 年 12 月采自烏魯木齊市 東白楊溝，經(jīng)由新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室帕 麗達(dá)·阿布利孜教授鑒定為小檗科小檗屬植物黑果小 檗( Berberis heteropoda Schrenk) 的 根。室 溫 陰 干，粉 碎，過 80 目篩，備用。鹽酸小檗堿( B21449 － 20 mg， 上海源葉生物科技有限公司) 、鹽酸巴馬汀( B21433 － 20 mg，上海源葉生物科技有限公司) 、阿魏酸( B20007 － 20 mg，上海源葉生物科技有限公司) 、氨水、正丁 醇、乙酸乙酯、甲酸、水、甲苯、甲醇、異丙醇、三氯甲烷、 醋酸、95% 乙醇、0. 4% H2 SO4，實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析 純。

2 方法與結(jié)果

2. 1 溶液配制

2. 1. 1 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸巴馬汀、阿魏酸、鹽酸小檗堿對照 品，分別置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解制得濃度為 0. 2 mg /mL 的對照品溶液，過0. 22 μm 的濾膜除雜，貯 于 4 ℃冰箱備用。

2. 1. 2 供試品溶液的制備

分別稱取黑果小檗根皮、根木質(zhì)部粉末各 8 份，每 份 5 g，置 50 mL 錐形瓶中，分別取其中 4 份加入 10 倍 量的 0. 4% H2 SO4、95% 乙醇、甲醇、蒸餾水 50 ℃、超聲 提取兩次，每次提取 1 h; 另取 3 份加入 10 倍量的 95% 乙醇、甲醇 80 ℃、蒸餾水回流提取 2 次，每次提取 2 h; 另取一份加入 0. 4% H2 SO4 溶液的樣品冷浸提取 2 次，過濾合并濾液，揮干溶劑，得不同溶劑提取物浸膏， 稱重。精密稱取 100 mg 不同溶劑提取物浸膏，分別置 于 5 mL 容量瓶中，加甲醇溶解、稀釋至刻度，搖勻得一 定濃度的供試品溶液，過 0. 22 μm 濾膜，過濾除雜，貯 于 4 ℃冰箱冷藏，備用。各樣品稱樣量見下表 1。

2. 1. 3 混合對照品的制備

精密吸取 2. 1. 1 項(xiàng)下對照品溶液各 1 mL，置于 5 mL 容量瓶中，搖勻得混合對照品溶液，過 0. 22 μm 濾 膜，過濾除雜，貯于 4 ℃冰箱，備用。

2. 2 TLC 方法的建立

2. 2. 1 展開系統(tǒng)的考察

分別吸取 2. 1. 1 項(xiàng)下混合對照品溶液和 2. 1. 2 項(xiàng) 下供試品溶液各 2 μL，點(diǎn)于同一薄層板上，以正丁醇 － 乙酸乙酯 － 甲酸 － 水( 3∶ 5∶ 1∶ 1) 、甲苯 － 乙酸乙酯－ 甲醇 － 異丙醇 － 氨水( 6∶ 3∶ 2∶ 1. 5∶ 0. 5) 、三氯甲烷 － 甲醇 － 水( 15∶ 7. 5∶ 2) 、三氯甲烷 － 甲酸 － 水( 6∶ 3∶ 0. 8) 、氯仿 － 甲醇 － 氨( 7. 5∶ 2∶ 0. 5) 、正丁醇 － 冰乙酸 － 水( 2∶ 0. 5∶ 1) 、氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 5∶ 4∶ 1) 、氯 仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 5∶ 5∶ 1) 、甲苯 － 乙酸乙酯 － 異 丙醇 － 甲醇 － 氨水( 6∶ 3∶ 1. 5∶ 1. 5∶ 0. 8) 9 種不同展開 系統(tǒng)展開，取出，晾干，置于紫外 366 nm 下檢視。通過 圖中斑點(diǎn)數(shù)目、分離度和拖尾情況確定最佳展開系統(tǒng)， 檢視結(jié)果以斑點(diǎn)數(shù)目多、分離度好、基本無拖尾情況者 為佳。其中氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 5∶ 5∶ 1) 、氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 5∶ 4∶ 1) 斑點(diǎn)較清晰，所以選擇展開 系統(tǒng)氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸為最佳展開系統(tǒng)，但需調(diào) 整展開劑的比例以達(dá)到最佳的色譜展開條件。

2. 2. 2 不同展開劑比例的考察

分別吸取 2. 1. 1 項(xiàng)下供試品溶液和 2. 1. 3 項(xiàng)下混 合對照品溶液各 2 μL，點(diǎn)于同一薄層板上，以氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 4∶ 4∶ 1) 、氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 4 ∶ 4∶ 1. 5) 、氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 4∶ 4∶ 2) 、氯仿 － 乙 酸乙酯 － 甲酸( 4∶ 4. 5∶ 1. 5) 4 種不同展開比例展開，取 出，晾干，置于紫外 366 nm 下檢視。展開劑氯仿 － 乙 酸乙酯 － 甲酸比例為 4∶ 4. 5∶ 1. 5 時(shí)展開效果較好，斑 點(diǎn)清晰，分離度好，故選擇展開劑氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲 酸比例為 4∶ 4. 5∶ 1. 5。

2. 2. 3 點(diǎn)樣量的考察

分別吸取 2. 1. 3 項(xiàng)下對照品混合溶液 1、2、3 μL 及 2. 1. 2 項(xiàng)下供試品溶液 1、2、3 μL 點(diǎn)樣于同一薄層 板上，以最優(yōu)展開系統(tǒng)為條件，展開，取出，晾干，置于 紫外 366 nm 下檢視。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，點(diǎn)樣量為 1 μL 時(shí)，斑 點(diǎn)清晰明顯、斑點(diǎn)間的分離效果也最好，當(dāng)點(diǎn)樣量大于 1 μL 時(shí)，斑點(diǎn)之間分離效果不好，不能保證各組分完 全分離，故確定最佳點(diǎn)樣量為 1 μL。

3 討論

供試品制備過程中，以甲醇( 化學(xué)純) 為溶劑，因?yàn)楣┰嚻返募状既芤涸诒由V條件下較穩(wěn)定并且有 較好的溶解度，因此確定樣品溶劑為甲醇溶液。本實(shí) 驗(yàn)確定以氯仿 － 乙酸乙酯 － 甲酸( 4∶ 4. 5∶ 1. 5) 為展開 系統(tǒng)，展開溫度為 25 ℃，薄層色譜法選擇硅膠 GF254 板，點(diǎn)樣量為 1 μL，分別于 366 nm、254 nm 進(jìn)行檢視， 其中鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿和阿魏酸斑點(diǎn)清晰、分離效果好。