苯唑嗪（研發(fā)代號(hào)：Q808）化學(xué)名為 6-（4-氯苯氧 基）-四唑并酞嗪，是一種新的抗癲癇藥物，具有增 強(qiáng)腦內(nèi)核團(tuán)自發(fā)性抑制性突觸后電流（sIPSC）頻率、增 加γ-氨基丁酸（GABA）含量的作用，其保護(hù)指數(shù)（PI）優(yōu) 于卡馬西平和盧非酰胺，在整體和離體癲癇模型中均具 有較強(qiáng)的抗癲癇作用，與傳統(tǒng)抗癲癇藥物苯妥英鈉、托 吡酯相比，具有較強(qiáng)的抗驚厥作用且神經(jīng)毒性較低。 以苯唑嗪為原料制成的苯唑嗪膠囊目前已獲得臨床試 驗(yàn)批件，正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，在國(guó)內(nèi)外尚未有關(guān)于該藥 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究報(bào)道。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010AHT型HPLC儀，包括二極管陣列檢測(cè)器、 色譜工作站（日本島津公司）；KQ-2200型超聲波清洗儀 （昆山舒美超聲儀器有限公司，文中采用參數(shù)為功率：250 W，頻率：40 kHz）；BT125D 型十萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。

1.2 藥品與試劑

苯唑嗪對(duì)照品（批號(hào)：20140331，純度：＞99.9％）、5- 氯四唑并酞嗪對(duì)照品、6-（2，4-二氯 苯氧基）-四唑并酞嗪對(duì)照品均由延 邊大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)教研部制備；苯唑嗪膠囊（吉 林省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室，批號(hào)：20140521、20140522、20140523，規(guī)格：0.15 g）；乳糖（美國(guó) Foremost Farms 公 司）；交聯(lián)聚維酮（PVPP，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）； 微晶纖維素（湖州展望藥業(yè)有限公司）；聚乙烯己內(nèi)酰 胺-聚醋酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物（Soluplus®，德國(guó) 巴斯夫有限公司）；甲醇、乙腈均為色譜純，水為純凈水， 其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色 譜 柱 ：Inertsil ODS- 2 C18（250 mm × 4.6 mm，5 µm）；流動(dòng)相：乙腈-水（55∶45，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：223 nm； 柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 µL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液

精密稱(chēng)取苯唑嗪對(duì)照品10.04 mg， 置于50 mL量瓶中，加乙腈超聲（功率：250 W，頻率：40 kHz，下同）10 min；取出，放冷，稀釋至刻度，搖勻，精密 量取 5 mL，置于 25 mL 量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖 勻，制成每1 mL中含苯唑嗪40.16 μg的溶液，作為對(duì)照 品溶液。

2.2.2 供試品溶液

精密稱(chēng)取苯唑嗪膠囊內(nèi)容物適量 （約相當(dāng)于苯唑嗪10 mg），置于50 mL量瓶中，用乙腈超 聲 10 min；取出，放冷，稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5 mL，置于25 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 系統(tǒng)適用性溶液

精密稱(chēng)取雜質(zhì) 1、雜質(zhì) 2 對(duì)照 品各5 mg，置于10 mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，得系 統(tǒng)適用性貯備液；精密稱(chēng)取苯唑嗪對(duì)照品 10.06 mg，置 于50 mL量瓶中；精密移取系統(tǒng)適用性貯備液1 mL，置 于上述50 mL量瓶中，定容，搖勻，得系統(tǒng)適用性溶液。

2.2.4 空白輔料溶液

按樣品處方精密稱(chēng)取除苯唑嗪 外的空白輔料適量，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行制備，即 得空白輔料溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液（批號(hào)：20140523）、系統(tǒng)適用性溶液及空白輔料溶液各20 μL， 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果，雜質(zhì)1、雜質(zhì)2與 苯唑嗪的分離度＞5，其余各峰之間的分離度＞1.5，主峰 拖尾因子為1.14～1.16，理論板數(shù)以主成分峰計(jì)＞5 000， 詳見(jiàn)圖1。


份加入30％過(guò)氧化氫溶液5 mL，室溫放置3 h，加乙腈稀 釋至刻度，搖勻，作為氧化破壞溶液；1份加入5 mL蒸餾 水，70 ℃水浴加熱3 h，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為高 溫破壞溶液；1 份加入乙腈 5 mL，使溶解，置于 4 500 lx 條件下照射18 h，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為光照破 壞溶液。精密量取上述 5 種溶液及未破壞樣品溶液各 20 µL，分別注入色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè) 定，記錄其色譜圖。

2.4 方法專(zhuān)屬性考察

取苯唑嗪膠囊10粒（批號(hào)：20140523）內(nèi)容物研細(xì)， 精密稱(chēng)取約5 mg，共5份，分別置于25 mL量瓶中：1份 加入1 mol/L的鹽酸溶液 5 mL，55 ℃水浴加熱3 h，用1 mol/L的氫氧化鈉溶液中和，調(diào)節(jié)至中性，加乙腈稀釋至 刻度，搖勻，作為酸破壞溶液；1份加入0.1 mol/L的氫氧 化鈉溶液 5 mL，靜置3 h，用1 mol/L的鹽酸溶液中和，調(diào) 節(jié)至中性，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為堿破壞溶液；

3 討論

苯唑嗪膠囊是針對(duì)癲癇治療研發(fā)的化學(xué)藥品1.1類(lèi) 新藥 ，目前，相關(guān)研究已對(duì)苯唑嗪原料藥中的雜質(zhì)進(jìn)行了分離鑒定及初步的測(cè)定 ，但并未對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)的 質(zhì)量檢查方法研究，特別是對(duì)苯唑嗪膠囊，目前國(guó)內(nèi)外 尚無(wú)相關(guān)研究的文獻(xiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)采用HPLC法，對(duì)苯 唑嗪膠囊主成分的含量及有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了深入研究，以 更好、更全面地控制該制劑的質(zhì)量。 在色譜條件優(yōu)化過(guò)程中，筆者主要考察了流動(dòng)相組 成以及檢測(cè)波長(zhǎng)對(duì)分離效果的影響。在流動(dòng)相組成中， 分別比較了甲醇-水和乙腈-水為流動(dòng)相的分離效果，結(jié) 果表明，選擇乙腈-水（55∶45，V/V）為流動(dòng)相時(shí)，主成分 與各雜質(zhì)間的分離效果良好（分離度＞2），保留時(shí)間（雜 質(zhì)1：5.355 min；主成分：12.224 min；雜質(zhì)2：18.088 min） 合適，且主成分與雜質(zhì)均能滿足分析要求。采用二極管 陣列檢測(cè)器對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)各成分在223 nm 波長(zhǎng)處有最大吸收，且靈敏度較高。故選擇223 nm作為 本研究的檢測(cè)波長(zhǎng)。